1-8- روشهای تشخیص ……………………………………………………………………………………………………………………..20

 

1-9- درمان ………………………………………………………………………………………………………………………………………21

 

1-10- عوارض داروهای ضد سل ……………………………………………………………………………………………………….22

 

1-11- پیشگیری ………………………………………………………………………………………………………………………………..22

 

1_11 _1_ پیشگیری در جامعه ……………………………………………………………………………………………………………23

 

1_11_2_ پیشگیری با واکسن سل………………………………………………………………………………………………………..23

 

1-12- اهمیت مبارزه صحیح با سل ……………………………………………………………………………………………………..23

 

1-13- سل گاوی……………………………………………………………………………………………………………………………….24

 

1-13-1-بیماری سل در گاو ……………………………………………………………………………………………………………….24

 

1-13-2-علائم بالینی سل گاوی…………………………………………………………………………………………………………..26

 

1-13-3-تشخیص بیماری سل در گاو …………………………………………………………………………………………………27

 

1-13-4-کنترل بیماری سل ………………………………………………………………………………………………………………..27

 

1_14_ راههای ابتلا به سل گاوی ………………………………………………………………………………………………………..29

 

1-15- تعیین هویت مایکوباکتریومها ……………………………………………………………………………………………………30

 

1_15_1_تعیین هویت مایکوباکتریومها بر اساس خصوصیات فنوتیپیک ………………………………………………….30

 

1- 15 -2- تعیین هویت مایکوباکتریومها بر اساس خصوصیات ژنوتیپی………………………………………………….35

 

1-15-2-1-تشخیص بیماری ……………………………………………………………………………………………………………..36

 

1-15-2-2- تعیین هویت مولکولی مایکوباکتری هاجهت تعیین گونه ……………………………………………………..39

 

1-15-2-2-1-پروب های اسید نوکلئیک ……………………………………………………………………………………………..39

 

1-15-2-2-2 ریبوتایپینگ ………………………………………………………………………………………………………………….39

 

1-15-2-2-3- روش هیبریدیزاسیونDNA – DNA ……………………………………………………………………………39

 

1-15-2-2-4-پروب های هیبریداسیون داخل ژنومی تجاری …………………………………………………………………40

 

1-15-3-ژنوم مایکوباکتریوم توبرکلوزیس کمپلکس ………………………………………………………………………………40

 

1-16-تکنیک های ژنومی …………………………………………………………………………………………………………………..42

 

1 _16_1_تكنیك‌های ژنومی كه اساس آنها PCR نمی‌باشد …………………………………………………………………..42

 

1_16_1_2_انگشت‌نگاری DNA  به روش RFLP …………………………………………………………………………….43

 

1_16_2_1_اسپولیگوتایپینگ………………………………………………………………………………………………………………50

 

1_16_1_2_5_استفاده از مخلوط پروب‌ها در RFLP………………………………………………………………………..  50

 

1_16_2_2_ VNTR ……………………………………………………………………………………………………………………….51

 

فصل دوم (مروری بر تحقیقات انجام شده) …………………………………………………………………………………………55

 

2-1-تاریخچه بیماری سل ………………………………………………………………………………………………………………….56

 

2-2-وضعیت بیماری سل در جهان ……………………………………………………………………………………………………..58

 

2-3-تاریخچه سل گاوی در ایران ……………………………………………………………………………………………………….65

 

فصل سوم (مراحل روش تحقیق) ………………………………………………………………………………………………………70

 

3-1-جمع آوری نمونه ها …………………………………………………………………………………………………………………..71

 

3-2-مواد و تجهیزات مورد نیاز……………………………………………………………………………………………………………71

 

3_2_1_ مواد مصرفی…………………………………………………………………………………………………………………………71

 

3_2_2_تجهیزات مورد نیاز ………………………………………………………………………………………………………………..73

 

3_2_2_2 _تجهیزات مورد نیاز برای استخراج DNA…………………………………………………………………………….73

 

3_2_2_3_ تجهیزات برای PCR…………………………………………………………………………………………………………73

 

3_2_2_4_ تجهیزات برای هضم آنزیمی………………………………………………………………………………………………74

 

3_2_2_5_ تجهیزات الکتروفورز DNA و ساترن بلاتینگ……………………………………………………………………..74

 

3_2_2_6_ تجهیزات هیبریداسیون………………………………………………………………………………………………………74

 

3_2_2_7_ تجهیزات آشکار سازی………………………………………………………………………………………………………74

 

3_2_2_8_ تجهیزات مورد نیاز برای نانودراپ………………………………………………………………………………………74

 

موارد روش تحقیق …………………………………………………………………………………………………………………………….74

 

3_3_13_4_1_تهیه گسترش از نمونه و رنگ آمیزی……………………………………………………………………………..74

 

3_4_1_3_تفسیر نتایج گسترش…………………………………………………………………………………………………………..76

 

3_4_ 2_کشت نمونه ها……………………………………………………………………………………………………………………..76

 

3_4_2_ 1_صلایه کردن نمونه ها ………………………………………………………………………………………………….76

 

3_4_2_2_ آلودگی زدایی و هموژنیزاسیون ……………………………………………………………………………………..76

 

3_4_2_3_سانتریفیوژ و خنثی سازی PH……………………………………………………………………………………… 78

 

3_4_2_4_ کشت در لوله های لونشتاین – جانسون حاوی گلیسیرین و پیرووات……………………………….79

 

 

3_4_3_بررسی کشت لوله های لونشتاین – جانسون  ………………………………………………………………………80

 

3_4_4_  رنگ آمیزی به روش فلئورو کروم …………………………………………………………………………………. 80

 

3_4_5_ انجام تست های بیوشیمیایی تعیین هویت ………………………………………………………………………….81

 

3_4_5_1_تست نیاسین ……………………………………………………………………………………………………………….82

 

3_4_5_2_ تست کاتالاز ……………………………………………………………………………………………………………. 82

 

3_4_ 6_کشت مجدد در لوله لونشتاین – جانسون…………………………………………………………………………….82

 

3_4_7_استخراجDNA ………………………………………………………………………………………………………………..83

 

3_4_7_1_آماده سازی مواد مصرفی برای استخراج DNA……………………………………………………………… 83

 

3_4_7_2_ كنترل و جمع آوری سلولهای باكتری رشد یافته ……………………………………………………………..83

 

3_4_7_3_مراحل استخراج DNA ………………………………………………………………………………………………..84

 

3_4_8_ارزیابی كیفیت و کمیتDNAاستخراج شده………………………………………………………………………….86

 

3_4_8_1_ارزیابی كفیت DNA استخراج شده………………………………………………………………………………..86

 

3_4_8_1_1_آماده سازی مواد مصرفی  جهت  ارزیابی کیفی DNA استخراج شده…………………………….86

 

بافر تریس-بورات-EDTA یک برابر……………………………………………………………………………………………….86

 

بافر نمونه………………………………………………………………………………………………………………………………………86

 

ژل آگارز……………………………………………………………………………………………………………………………………….86

 

3_4_8_2_ارزیابی کمیت DNA استخراج شده برای انجام PCR و RFLP……………………………………… 88

 

3_4_8_3_ PCR بر اساس پروتکل WHO………………………………………………………………………………….. 90

 

3-4-8-3-1مراحل PCR روی نمونه های DNA استخراج شده………………………………………………………..91

 

3-4-9- الكتروفورز محصولPCR……………………………………………………………………………………………….. 92

 

RFLP …………………………………………………………………………………………………………………………………………92

 

3_4_10_هضم DNA  کروموزمی به وسیله آنزیم Pvu II………………………………………………………………. 93

 

3_4_11_جداسازی قطعاتDNA به وسیله الکتروفورز……………………………………………………………………..94

 

3_4_12_ ساترن بلاتینگ ………………………………………………………………………………………………………………94

 

3_4_12_1_آماده سازی محلول های مورد نیاز ساترن بلاتینگ …………………………………………………………94

 

3_4_12_2_عمل آوری ژل قبل از بلاتینگ ……………………………………………………………………………………..96

 

3_4_12_3_بلاتینگ به روش موئینه ……………………………………………………………………………………………….96

 

3_4_12_3_عمل آوری غشا بعد از بلاتینگ ……………………………………………………………………………………97

 

3_4_13_تثبیت DNA برروی غشا ………………………………………………………………………………………………..98

 

3_4_14_تهیه پروب های هیبریداسیون و مک هیبریداسیون …………………………………………………………………..98

 

3_4_14_1_پروب PGRS ………………………………………………………………………………………………………………..99

 

3_4_14_2_به دست آوردن رقت مناسب برای پروبPGRS  به روش مک هیبریداسیون………………………..99

 

3_4_15_شناسایی ……………………………………………………………………………………………………………………………100

 

3_4_16_دات بلاتینگ ……………………………………………………………………………………………………………………..101

 

3_4_17_پری هیبریداسیون و هیبریداسیون با پروب نشان دار با دیگوکسیژنین ……………………………………..102

 

3_4_17_1_مرحله پری هیبریداسیون ………………………………………………………………………………………………..102

 

3-4-17-2- مرحله هیبیریداسیون ………………………………………………………………………………………………………102

 

فصل چهارم(نتایج و بحث ) …………………………………………………………………………………………………………….104

 

نتایج و بحث ……………………………………………………………………………………………………………………………………105

 

4-1- نمونه برداری ………………………………………………………………………………………………………………………….105

 

4-2- بررسی كشت لوله های لونشتاین– جانسون ………………………………………………………………………………..105

 

4-3-آزمون وجود IS6110 ………………………………………………………………………………………………………………106

 

4-3-1- نتایج واكنش PCR……………………………………………………………………………………………………………. 106

 

4-4- بررسی کمیت DNA استخراج شده برای هضم آنزیمی ((RFLP…………………………………………………..107

 

4-5- بررسیDNA استخراج شده ……………………………………………………………………………………………………..108

 

4-6- نتایج هضم آنزیمی(RFLP)، بررسی الکتروفورز و تهیه عکس……………………………………………………….109

 

4-7- نتایج ساترن بلاتینگ ………………………………………………………………………………………………………………..110

 

فصل پنجم(نتیجه گیری و پیشنهادات) ……………………………………………………………………………………………….114

 

پیشنهادات ……………………………………………………………………………………………………………………………………….125

 

منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………..126

 

منابع فارسی………………………………………………………………………………………………………………………………………126

 

منابع انگلیسی……………………………………………………………………………………………………………………………………127

 

 

 

فهرست جدول ها

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

عنوان جدول                                                                                                              صفحه

جدول1–1نامگذاری مایکوباکتریوم ها …………………………………………………………………………………………………….  8

جدول1-2:لیست جدید تستهای رایج شیمیائی برای تمایز گونه­های مختلف کندرشد مایکوباکتریای …………….  33

جدول 1- 3: لیست جدید تستهای رایج شیمیائی برای تمایز گونه­های مختلف سریع الرشد مایکوباکتریایی …..……………  35

جدول 3-1: تعداد 65 نمونه عقده­های لنفاوی گاو ارسالی به موسسه سرم سازی رازی ………………………………..  71

جدول 3-2: لیست مواد مصرفی ……………………………………………………………………………………………………………  72

جدول 3_3 : مواد متشکله در محیط کشت لونشتاین- جانسون …………………………………………………………………  79

جدول 3-4:  تست­های تعیین هویت مایکوباکتریوم­ها ………………………………………………………………………………. 81

جدول 3-5: برنامه دما، زمان و چرخه ترموسایکلر …………………………………………………………………………………..  91

جدول 4-1- نمونه­های مورد استفاده به همراه الگوهای مشاهده شده و مکان جغرافیائی نمونه­ها …………………………..  113

 

 

 

فهرست شکل ها

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ی نوشته‌ها

tbody>