دانلود پایان نامه:جداسازی و شناسایی مولکولی باکتریهای اندوفتیک گیاه گندم و بررسی اثرات آنتاگونیسمی آنها علیه پاتوژنهای قارچی گیاه

2-1-7-2- قارچ Fusarium culmurum ……………………………………………………………………………………………. 13

2-1-7-3- قارچ Fusarium avenaceum…………………………………………………………………………………………… 13

2-1-7-4- قارچFusarium equiseta ……………………………………………………………………………………………. 14

2-1-7-5- قارچFusarium nivale 15

2-2- میکروارگانیسمهای ریزوسفر 15

2-3- اندوفیت و کلونیزاسیون ………………………………………………………………………………… 18

2-4- باکتریهای اندوفتیک و کاربرد آنها……………………………………………………………………. 21

2-4-1- افزایش تولید هورمونهای گیاهی……………………………………………………………………. 21

2-4-2- تثبیت بیولوژیکی نیتروژن……………………………………………………………………………… 25

2-4-3- فیتوبیورمیدیشن………………………………………………………………………………………….. 28

2-4-4- انحلال فسفات…………………………………………………………………………………………… 39

2-4-5- تولید سیدروفور……………………………………………………………………………………………. 41

2-4-6- تولید آنتیبیوتیک و آنتیبیوزیس………………………………………………………………………. 44

2-5- باکتریهای اندوفتیک و تولید آنزیم……………………………………………………………………….. 51

2-6- تنوع و جمعیت میکروارگانیسمهای یافت شده بهعنوان اندوفتیک………………………………….. 53

فصل سوم (مواد و روشها)

3-1- جداسازی و کشت باکتری اندوفتیک………………………………………………………………………. 59

3-1-1- مواد و وسایل لازم جهت جداسازی و کشت باکتریهای اندوفتیک از گیاهگندم……………. 59

3-1-2- روش کار……………………………………………………………………………………………………. 59

3-1-2-1- نمونه و نمونهگیری…………………………………………………………………………………….. 59

3-1-2-2- کشت و شناسایی………………………………………………………………………………………. 60

3-2-شناسایی فنوتیپی باکتریهای اندوفتیک…………………………………………………………………….. 60

3-2-1-رنگآمیزی گرم…………………………………………………………………………………………….. 60

3-2-2- تست کاتالاز……………………………………………………………………………………………….. 61

3-2-3- تست سیتوکروماکسیداز………………………………………………………………………………….. 61

3-2-4- تست کوآگولاز…………………………………………………………………………………………….. 61

3-2-5- تست حرکت………………………………………………………………………………………………. 62

3-2-6- تست هیدرولیزژلاتین…………………………………………………………………………………….. 62

3-2-7- تست سیمونسیترات……………………………………………………………………………………… 63

3-2-8- تستMR/VP…………………………………………………………………………………………………. 63

3-2-9- تست هیدرولیزنشاسته……………………………………………………………………………………. 63

3-2-10- تست هیدرولیزکازئین………………………………………………………………………………….. 64

3-3- شناسایی باکتریهای تولیدکننده ترکیبات ضدقارچی به روش مولکولار…………………………… 64

3-3-1- مواد و وسایل مورد استفاده جهت استخراج DNA………………………………………………… 64

3-3-2- روش استخراج DNA ژنومی…………………………………………………………………………… 65

3-3-3- روش تهیه ژل آگارز یک درصد……………………………………………………………………….. 65

3-3-4- انجامPCR………………………………………………………………………………………………………….. 66

3-3-4-1- وسایل مورد استفاده برای انجام PCR و شرایط دمایی دستگاه ترموسایکلر……………… 66

فصل چهارم (نتایج و بحث)

4-1- جداسازی باکتریهای اندوفتیک از گیاهگندم…………………………………………………………….. 67

4-2- شناسایی فنوتیپی باکتریهای اندوفتیک 68

4-3- ارزیابی اثر آنتاگونیسمی باکتریهای اندوفتیک برعلیه قارچهای بیوکنترلی و قارچهای پاتوژن
گیاهی……………………………………………………………………………………………………………………. 70

4-4- بررسی فعالیت آنزیم β-1و4گلوکاناز……………………………………………………………………. 76

4-4-1- مواد و وسایل لازم………………………………………………………………………………………… 76

4-4-2- روش تهیه محلول نمکی 1مولار………………………………………………………………………. 76

4-4-3- ترکیبات محیط CMCآگار1%…………………………………………………………………………… 77

4-4-4 معرف آزمایش کنگورد…………………………………………………………………………………….. 77

4-4-5 کشت و بررسی……………………………………………………………………………………………… 77

4-5- نتایج مربوط به شناسایی مولکولی باکتریها……………………………………………………………… 77

4-5-1- آنالیز کیفی محصولات PCR…………………………………………………………………………… 78

4-5-2- نتایج تعیین توالی………………………………………………………………………………………….. 78

فصل پنجم (نتیجه گیری)

5-1. نتیجه گیری……………………………………………………………………………………………………… 92

5-2پیشنهادات…………………………………………………………………………………………………………. 98

منابع و ماخذ……………………………………………………………………………………………………………. 99

چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………………. 109

فهرست جداول

عنوان جدول صفحه

جدول2-1. مشخصههایی از بیماری زنگ…………………………………………………………………………………………5

جدول2-2. مشخصههایی از بیماری سیاهک……………………………………………………………………………………..6

جدول2-3. انواع میکوتوکسین فوزاریومی……………………………………………………………………………………….12

جدول2-4. انواع ترشحات ریشه……………………………………………………………………………………………………18

جدول2-5. اندوفیتیکهای تثبیتکننده نیتروژن………………………………………………………………………………..28

جدول2-6. میکروارگانیسمهای مولد اسیدآلی………………………………………………………………………………….32

جدول2-7. میکروارگانیسمهای مولد بیوسورفاکتانت………………………………………………………………………..33

جدول2-8. میکروارگانیسمهای مولد گلیکوپروتئین………………………………………………………………………….34

جدول2-9. میکروارگانیسمهای اکسیدکننده و احیاءکننده…………………………………………………………………..35

جدول2-10. میکروارگانیسمهای دخیل در فیتوبیورمیدیشن……………………………………………………………….39

جدول2-11. میکروارگانیسمهای مولد سیدروفور…………………………………………………………………………….43

جدول2-12. اندوفیتهای مولد آنتیبیوتیک و عملکرد آنها……………………………………………………………..50

جدول3-1. شرایطPCR……………………………………………………………………………………………………………….66

جدول3-2. چرخهPCR………………………………………………………………………………………………………………..66

جدول3-3. توالی پرایمرطراحی شده برای16S rRNA………………………………………………………………………66

جدول4-1. نتایج آزمونهای بیوشیمیایی…………………………………………………………………………………………68

جدول4-2. اسامی قارچهای مورد آزمون………………………………………………………………………………………..71

جدول4-3. نتایج آنتاگونیسمی برعلیه Fusarium moniliforme………………………………………………………..72

جدول4-4. نتایج آنتاگونیسمی برعلیه Fusarium graminearum……………………………………………………..72

جدول4-5. نتایج آنتاگونیسمی برعلیهFusarium oxysporum…………………………………………………………..72

جدول4-6. نتایج آنتاگونیسمی برعلیه Fusarium culmorum…………………………………………………………..72

جدول4-7. نتایج آنتاگونیسمی برعلیه Tricoderma virida………………………………………………………………73

جدول4-8. نتایج آنتاگونیسمی برعلیه Tricoderma harizanum……………………………………………………….73

جدول4-9. نتایج آنتاگونیسمی برعلیه.Tricoderma asperellum………………………………………………………73

جدول4-10. نتایج آنتاگونیسمی برعلیه Macrophomina phaseolina………………………………………………73

جدول4-11. ترکیبات محیط CMCآگار1%……………………………………………………………………………………..76

جدول4-12. نتایج Blast……………………………………………………………………………………………………………..79

فهرست شکلها

عنوان شکل صفحه

شکل2-1. انواع زنگها…………………………………………………………………………………………………………………6

شکل2-2. انواع سیاهکها……………………………………………………………………………………………………………..7

شکل2-3. بیماری پاخوره………………………………………………………………………………………………………………8

شکل2-4. بیماری سوختگیزردبرگ……………………………………………………………………………………………….8

شکل2-5. بیماری لکهچشمی…………………………………………………………………………………………………………9

شکل2-6. بیماری ارگوت……………………………………………………………………………………………………………10

شکل2-7. بیماری جرب و پوسیدگی فوزاریومی…………………………………………………………………………….11

شکل2-8. ماکروکنیدی فوزاریومگرامیناروم…………………………………………………………………………………….13

شکل2-9. ماکروکنیدی فوزاریومکلموروم………………………………………………………………………………………13

شکل2-10. ماکروکنیدی فوزاریوماوناسئوم…………………………………………………………………………………….14

شکل2-11. ماکروکنیدی فوزاریوماکوئیست……………………………………………………………………………………14

شکل2-12. عملکرد PGPR………………………………………………………………………………………………………..17

شکل2-13. عملکردPGPB………………………………………………………………………………………………………….24

شکل2-14. متانوتروفهای اندوفتیک……………………………………………………………………………………………38

شکل2-15. متابولیتهای ثانویه اکتینوباکترها…………………………………………………………………………………44

شکل2-16. کلونیزاسیون اندوفیتها……………………………………………………………………………………………..54

شکل3-1. کیت استخراج DNA شرکت سیناژن………………………………………………………………………………64

عنوان شکل صفحه

شکل4-2. تاثیر آنتاگونیسمی ایزوله 2g₅₁ علیه برخی از سویههای قارچی به روش کشتدوگانه……………74

شکل4-3. تاثیر آنتاگونیسمی ایزوله 1g₆₁ علیه برخی از سویههای قارچی به روش کشتدوگانه……………74

شکل4-4. تاثیر آنتاگونیسمی ایزوله G₁₃ علیه برخی از سویههای قارچی به روش کشتدوگانه…………….75

شکل4-5. تاثیر آنتاگونیسمی ایزوله G₁₄ علیه برخی از سویههای قارچی به روش کشتدوگانه…………….76

شکل4-6. محصول PCR…………………………………………………………………………………………………………….78

شکل4-7. همترازسازی توالی نمونه 2g₅₁………………………………………………………………………………….. 80

شکل4-8. سکانسژنی16srRNA نمونه 2g₅₁……………………………………………………………………………….81

شکل4-9. همترازسازی توالی نمونه 1g₆₁……………………………………………………………………………………83

شکل4-10. سکانسژنی 16srRNA نمونه 1g₆₁……………………………………………………………………………84

شکل4-11. همترازسازی توالی نمونه G₁₃…………………………………………………………………………………..86

شکل4-12. سکانسژنی 16srRNA نمونه G₁₃……………………………………………………………………………..87

شکل4-13. همترازسازی توالی نمونه G₁₄_.…………………………………………………………………………………..89

شکل4-14. سکانسژنی 16srRNA نمونه G₁₄……………………………………………………………………………..90

موضوعات: بدون موضوع لینک ثابت

فرم در حال بارگذاری ...

فید نظر برای این مطلب