2-5. راه های سرایت بیماری………………………………………………27

 

2-5-2. دوره نهفتگی………………………………………………………27

 

2-6. علائم بیماری…………………………………………………………….28

 

2-7-1.  تشخیص آزمایشگاهی بیماری………………………………………..29

 

-7-2.  انواع تست هاى سرولوژیك بروسلوز………………………………….33

 

2-7-2-1 تست آگلوتیناسیون داخل لوله ای استاندارد………………………………………33

 

2-7-2-2  تست آگلوتیناسیون ME2……………………………………………………….33

 

2-7-2-3. تست آنتی گلوبولین یا كمبس رایت………………………………………………34

 

2-7-2-4. تست فیكساسیون كمپلمان ( ثبوت مکمل )………………………………………34

 

2-7-2-5و6. تست های رادیوایمونواسی و ELISA…………………………………….34

 

2-7-2-7. تست رزبنگال………………………………………………………………….34

 

2-7-3. تشخیص بروسلوزیس بر اساس روش های مولکولی………….34

 

2-8. آنتی ژن های سطحی……………………………………………..35

 

2-8-1. لیپوپلی ساکارید(LPS  )…………………………………………35

 

2-8-2. پروتئین غشاء خارجی(OMP)………………………………….38

 

2-8-3. پورین های عمومی………………………………………………….41

 

2-9.  واکسن های بروسلوز………………………………………………42

 

2-9-1. واكسن های كونژوگه و طراحی آن ها……………………………………….49

 

2-9-1-2. انتخاب پروتئین حامل…………………………………………..50

 

2-9-1-1.  انتخاب پلی ساكارید…………………………………………………………..50

 

2-9-1-3.  نسبت پلی ساکارید به پروتئین………………………………….51

 

2-9-1-4. تهیه ی کونژوگه های ایمونوژن هاپتن–حامل…………………….51

 

2-9-1-5. پروتئین های حامل مناسب برای ایجاد کونژوگه های آنتی ژنیکی..52

 

2-9-1-6. ادجوانت های مناسب در طراحی واکسن کونژوگه………………..53

 

2-9-1-7. جفت شدگی شیمیایی ( اتصال) ……………………………………53

 

2-9-1-8. EDC یا EDAC …………………………………….54

 

2-9-1-9. آدپیک اسید دی هیدرازید …………………………………………55

 

2-9-1-10. كونژوگاسیون به شیوه آمیداسیون………………………………56

 

3-1. تهیه میکروارگانیسم مورد نظر……………………………………….58

 

3-2. باز کردن سوش لیوفریزه بروسلا آبورتوس……………………..58

 

3-3. کنترل سوش لیوفیلیزه از نظرRough و Smooth بودن……..59

 

3-4. تهیه بیوماس سلولی………………………………………………….60

 

3-5. استخراج و تخلیص LPS بروسلا آبورتوس S99……………….61

 

3-5-1. د تو کسیفیه کردن LPS با روش قلیایی…………………………..63

 

3-5-2. آزمون Novotny…………………………………………………..63

 

3-6. استخراج و خالص سازی Omp بروسلا آبورتوس RB51……………64

 

3-6-2. اندازه‌گیری پروتئین با روش لوری…………………………………..65

 

3-7. کونژوگاسیون Omp و LPS بروسلا آبورتوس………………………..68

 

3-8. ستون کروماتوگرافی برای تخلیص کونژوگه………………………..69

 

3-8-1. مراحل پک کردن ستون کروماتوگرافی……………………….69

 

3-9. آزمون کنترل کیفی کونژوگه………………………………………71

 

3-9-1. کنترل تب زایی در خرگوش(in vivo test)……………………71

 

3-9-2. کنترل توکسیسیته غیر عادی(Abnormal Toxicity)………..72

 

3-10. واکسیناسیون  و سنجش ایمنی زایی کونژوگه……………………..72

 

3-11. آزمون بررسی فعالیت باکتری کشی سرم حیوان(سرم باکتریسیدال اسیSBA)……..73

 

3-11-1. اصول آزمون SBA……………………………………………74

 

 

4-1. تعیین میزان LPS خام در نمونه استخراج شده با آزمون نووتنی……77

 

4-2. تعیین غلظت پروتئین در نمونه Omp بروسلا آبورتوس RB51 به روش لوری………….80

 

4-3. نتایج کنترل کیفی کونژوگه……………………………………….81

 

4-6. نتایج بررسی کنترل توکسیسیته غیر عادی(Abnormal toxicity)..82

 

4-5. نتایج کنترل تب زایی در خرگوش (in vivo test)………………..82

 

4-7. ارزیابی فعالیت باکتری کشی سرم باکتریوسیدال اسی(SBA)…………..83

 

فهرست شکل ها

 

شکل(2-1)- عفونت دریچه قلب توسط B.abortus ……………….12

 

شکل(2-2)بروسلا آبورتوس دارای منشاء گاوی…………………………………………..21

 

شکل(2-3) بروسلا سوئیس دارای منشاء خوک……………………………………………..22

 

شکل(2-4) بروسلا سوئیس دارای منشاء موش صحرایی………………………………….23

 

شکل(2-5) بروسلا سوئیس دارای منشاء پستانداران دریایی……………………………….24

 

شکل(3-1) کنترل سوش RB51 با استفاده از اکروفلاوین………………………………..60