2-3-5-لیپوتیکوئیک اسید………………………………………………………………………………………………………………………………… 10

 

2-3-6-همولیزین انتروکوکوس فکالیس…………………………………………………………………………………………………………… 11

 

2-3-7-آنتی ژن آندوکاردیتی انتروکوکوس فکالیس…………………………………………………………………………………………… 11

 

2-3-8-پروتئین سطحی انتروکوکی (ESP )……………………………………………………………………………………………………… 11

 

2-3-9-ادهسین کلاژن انتروکوکوس فکالیس (ACE )………………………………………………………………………………………. 12

 

2-4-بیماری زایی……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 12

 

2-4-1-باکتریمی……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 12

 

2-4-2-عفونت های مجاری ادراری…………………………………………………………………………………………………………………. 13

 

2-4-3-اندوکاردیت…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 13

 

2-4-4-عفونت های داخل شکمی، لگنی وبافت های نرم………………………………………………………………………………….. 13

 

2-4-5-سایر عفونت های انتروکوکی……………………………………………………………………………………………………………….. 14

 

2-5-شناسایی انترکوک‏ها…………………………………………………………………………………………………………………………………… 14

 

2-6-درمان انترکوک‏ها………………………………………………………………………………………………………………………………………. 15

 

2-6-1-مقاومت آنتی بیوتیکی…………………………………………………………………………………………………………………………… 16

 

2-6-1-1-مقاومت به گلیکوپپتیدها………………………………………………………………………………………………………………….. 17

 

2-6-1-1-الف- عوامل زمینه ساز کلنیزاسیون انتروکوک های مقاوم به ونکومایسین(VRE)……………………………… 17

 

2-6-1-2-مقاومت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام……………………………………………………………………………………………… 19

 

2-6-1-3-مقاومت به آنتی بیوتیک های تتراسایکلین……………………………………………………………………………………….. 20

 

2-6-1-4-مقاومت به لینکوزامیدها………………………………………………………………………………………………………………….. 20

 

2-6-1-5-مقاومت به استرپتوگرامین B وA……………………………………………………………………………………………………… 21

 

2-6-1-6-مقاومت به اگزازولیدون…………………………………………………………………………………………………………………… 21

 

2-6-1-7-مقاومت به اورنی مایسین………………………………………………………………………………………………………………… 22

 

2-6-1-8-مقاومت در برابر آنتی بیوتیک های ماکرولیدی…………………………………………………………………………………. 22

 

2-6-1-9-مقاومت به کلرامفنیکل…………………………………………………………………………………………………………………….. 23

 

2-6-1-10-مقاومت به آمینوگلیکوزیدها…………………………………………………………………………………………………………. 24

 

2-6-1-10-الف- تاریخچه روند گسترش مقاومت های آمینوگلیکوزیدی……………………………………………………….. 25

 

2-6-1-10-ب- انواع مقاومت به آمینوگلیکوزیدها…………………………………………………………………………………………. 25

 

2-6-1-10-پ- اهمیت مقاومت آمینوگلیکوزیدی………………………………………………………………………………………….. 27

 

2-6-1-10-ت-HLAR و و افزایش مرگ ومیر……………………………………………………………………………………………….. 28

 

2-6-2-مقاومت چنددارویی( MDR)……………………………………………………………………………………………………………….. 28

 

2-7- روش های شناسایی سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک……………………………………………………………………………….. 29

 

2-7-1- روش های مبتنی بر فنوتیپ………………………………………………………………………………………………………………… 29

 

2-7-1-1- روش انتشار دیسک در آگار( دیسک دیفیوژن)……………………………………………………………………………….. 29

 

2-7-1-2- روش تهیه رقت در محیط مایع( براث دیلوشن )…………………………………………………………………………….. 30

 

2-7-1-3 – روش تهیه رقت در محیط آگار( آگار دیلوشن )…………………………………………………………………………….. 30

 

2-7-2- روش های مبتنی بر ژنوتیپ………………………………………………………………………………………………………………… 31

 

2-7-2-1-Triplex-PCR……………………………………………………………………………………………………………………………….. 31

 

2-7-2-1-الف-طراحی واجرایTriplex-PCR……………………………………………………………………………………………….. 32

 

2-7-2-1-ب-تیتراسیون اجزای واکنش………………………………………………………………………………………………………….. 33

 

2-7-2-1-3 -شرایط ترموسایکلر……………………………………………………………………………………………………………………. 33

 

2-8-اپیدمیولوژی عفونت های انتروکوکی…………………………………………………………………………………………………………. 33

 

2-9-مروری بر پیشینه پژوهش………………………………………………………………………………………………………………………….. 35

 

فصل سوم – مواد و روش‏ها

 

3-1-وسایل موردنیاز…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 40

 

3-2-مواد موردنیاز……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 41

 

3-3-طریقه ساخت محیط های کشت………………………………………………………………………………………………………………… 43

 

3-3-1-محیط بلادآگار…………………………………………………………………………………………………………………………………….. 43

 

3-3-2-محیط BHI براث…………………………………………………………………………………………………………………………………. 43

 

3-3-3-محیط مولر هینتون آگار……………………………………………………………………………………………………………………….. 44

 

3-3-4-محیط پایه قند……………………………………………………………………………………………………………………………………… 44

 

3-4-جمع آوری نمونه……………………………………………………………………………………………………………………………………… 45

 

3-5-جدا سازی سویه ها…………………………………………………………………………………………………………………………………… 45

 

3-6-نگهداری سویه ها……………………………………………………………………………………………………………………………………… 46

 

3-7-آنتی بیوگرام……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 46

 

3-7-1-تهیه سوسپانسیون باکتریایی………………………………………………………………………………………………………………….. 46

 

3-7-2-روش آنتی بیوگرام……………………………………………………………………………………………………………………………….. 47

 

3-8-بررسی مقاومت افزایش یافته به جنتامایسین و استرپتومایسین……………………………………………………………………. 48

 

3-9-اجرای PCR……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 48

 

3-9-1-آماده سازی واستخراج ژنوم………………………………………………………………………………………………………………….. 48

 

3-9-1-1-جوشاندن………………………………………………………………………………………………………………………………………… 49

 

3-10-اندازه گیری غلظت DNA ژنومیک تخلیص شده……………………………………………………………………………………. 49

 

3-11-الکتروفورز محصول استخراج ژنوم…………………………………………………………………………………………………………. 50

 

3-12-انتخاب و سنتز پرایمر…………………………………………………………………………………………………………………………….. 50

 

3-13-روش آماده سازی پرایمرها……………………………………………………………………………………………………………………… 51

 

3-13-1-محلول کاری پرایمر PCR…………………………………………………………………………………………………………………. 51

 

3-13-2- ترکیب واکنش PCR برای هر نمونه…………………………………………………………………………………………………. 52

 

3-14-انجام واکنش PCR…………………………………………………………………………………………………………………………………. 52

 

3-15-طریقه ساخت بافر…………………………………………………………………………………………………………………………………… 54

 

3-15-1-تهیه بافر(SX )TBE…………………………………………………………………………………………………………………………… 54

 

3-15-2-تهیه ژل Buffer  Loading  Gel……………………………………………………………………………………………………. 54

 

3-16-تهیه ژل الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………………………………… 55

 

3-16-1-تهیه‌ی ژل آگاروز جهت انجام الکتروفورز  ژنوم اسنخراج شده و محصول PCR…………………………………. 55

 

3-17-تعیین توالی……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 55

 

فصل چهارم – نتایج و بحث

 

4-1-نتایج مربوط به جداسازی گونه های انتروکوکی از نمونه های بالینی………………………………………………………….. 56

 

4-2-نتایج حاصل از کشت انتروکوک ها بر روی محیط و رنگ آمیزی گرم……………………………………………………….. 57

 

4-3-نتایج حاصل از حساسیت آنتی بیوتیکی به روش دیسک دیفیوژن………………………………………………………………. 61

 

4-4-نتایج حاصل از استخراج…………………………………………………………………………………………………………………………… 61

 

4-5-نتایج PCR……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 62

 

4-6-بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 66

 

فصل پنجم – نتیجه‏گیری

 

5-1- نتیجه‏گیری………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 71

 

5-2-پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 72

 

منابع فارسی………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 73

 

منابع غیرفارسی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 73

 

چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 84

 

فهرست جدول‏ها

 

عنوان                                                                                                                        صفحه

 

جدول(3-1) اجزای تشکیل دهنده محیط بلاد آگار…………………………………………………………………………………………….. 43

 

جدول(3-2) اجزای تشکیل دهنده ی محیط BHI براث……………………………………………………………………………………… 43

 

جدول(3-3) اجزای تشکیل دهنده محیط مولر هینتون آگار………………………………………………………………………………… 44

 

جدول(3-4) اجزای تشکیل دهنده محیط پایه قند………………………………………………………………………………………………. 44

 

جدول(3-5) مشخصات دیسک های آنتی بیوتیکی استفاده شده………………………………………………………………………….. 48

 

جدول(3-6) پرایمرهای استفاده شده برای پیدا کردن به سویه های انتروکوکی مقاوم به آمینوگلیکوزیدی…………….. 50

 

جدول( 3-7)محلول کاری جهت پرایمر  aac(6ʹ)-Ie-aph(2ʹʹ)-Ia………………………………………………………………….. 51

 

جدول( 3-8 )محلول کاری جهت پرایمر  aph(3ʹ)-IIIa……………………………………………………………………………………. 51

 

جدول (3-9 )محلول کاری جهت پرایمر  ant(4)-Іa………………………………………………………………………………………… 51

 

جدول( 3-10) محلول کاری جهت PCR…………………………………………………………………………………………………………… 52

 

جدول(3-11) برنامه PCR  بهینه سازی شده برای جفت پرایمر aac(6ʹ)-Ie-aph(2ʹʹ)-Ia……………………………….. 53

 

جدول(3-12)برنامه PCR  بهینه سازی شده برای جفت پرایمر aph(3ʹ)-IIIa……………………………………………………. 53

 

جدول(3-13) برنامه PCR  بهینه سازی شده برای جفت پرایمر ant(4)-Іa……………………………………………………….. 54

 

جدول( 3-14) اجزای تشکیل دهنده بافر TBE………………………………………………………………………………………………….. 54

 

جدول(3-15) اجزای تشکیل دهنده ژل لودینگ بافر………………………………………………………………………………………….. 53

 

جدول( 4-1) درصد فروانی انتروکوکوس فکالیس و انتروکوکوس فاسیوم در نمونه های بالینی…………………………… 60

 

جدول(4-2) درصدفراوانی سویه های انتروکوک  حاوی یک ژن در نمونه های بالینی…………………………………………. 64

 

جدول(4-3) درصدفراوانی سویه های انتروکوک حاوی بیش از یک ژن در نمونه های بالینی………………………………. 66

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                                                                                        صفحه

 

نمودار(4-1) درصد فراوانی انتروکوک های جداسازی شده از نمونه های بالینی………………………………………………….. 57

 

نمودار(4-2) نتایج حاصل از روش دیسک دیفیوژن برای تمام ایزوله های انتروکوکی…………………………………………. 61

 

فهرست شکل‏ها

 

عنوان                                                                                                                        صفحه

 

شکل( 4-1) کشت در محیط5/6 درصد BHI Broth Nacl……………………………………………………………………………… 57

 

شکل(4-2) کشت روی محیط بلاد آگار ……………………………………………………………………………………………………………. 58