پایان نامه ارشد:مطالعه و شناسایی سویه های باکتریایی تولیدکننده کوتیناز |
 |
2- 3- 8- پایداری کوتیناز 36
2- 3- 9- فرایندهای در حال توسعه: بیوراکتور کوتیناز 38
2- 3- 10- مکانیسم عمل کوتیناز 39
2- 3- 11- مقایسهی آنزیم کوتیناز قارچی و باکتریایی.. 41
2- 4- نشانگرهای ژنتیکی.. 42
2- 5- نشانگرهای مورفولوژیکی.. 42
2- 6- نشانگرهای مولکولی.. 43
2- 7- نشانگرهای پروتئینی یا بیوشیمیایی.. 44
2- 8- نشانگرهای DNA.. 45
2- 8- 1- نشانگرهای DNA غیر مبتنی بر PCR.. 46
2- 8- 2- نشانگرهای مبتنی بر PCR.. 46
2- 9- نشانگرهای غیر اختصاصی.. 47
2- 9- 1- RAPD.. 47
2- 10- نشانگرهای اختصاصی.. 48
2- 10- 1- AFLP. 48
2- 10- 2- SSR.. 48
2- 10- 3- RFLP-PCR.. 50
2- 10- 4- RFLP Based PCR با اتصال ناقص… 51
فصل سوم مواد، تجهیزات و روش تحقیق.. 52
3- 1- استخراج کوتین.. 55
3- 2- نمونه برداری.. 55
3- 3- غربالگری و جداسازی گونههای تولیدکننده آنزیم کوتیناز 55
3- 4- تهیه slant از سویههای جدا شده 57
3- 5- نگهداری طولانی مدت سویهها 57
3- 6- تهیه گلیسرول. 58
3- 7- تهیه محیط کشتLB.. 58
3- 8- Assay آنزیمی.. 58
3- 9- Assay ویژه آنزیمی.. 60
3- 10- استخراج DNA.. 60
3- 10- 1- استخراج DNA به روش جوشاندن. 60
3- 10- 2- استخراج DNA به رو ش CTAB.. 61
3- 10- 3- روش استخراج DNA با کیت.. 64
3- 11- اندازهگیری کیفیت و غلظت DNA.. 65
3- 12- رنگ آمیزی با اتیدیوم برماید. 69
3- 13- واكنش زنجیره ای پلیمراز Polymerase Chain Reaction. 70
3- 14- راه اندازی واکنش PCR.. 74
3- 15- برنامهPCRبرای نشانگرRAPD.. 76
3- 16- توالییابی سویههای تولیدکننده آنزیم کوتیناز با استفاده از 16S rDNA.. 77
3- 17- الکتروفورز محصولات واکنش PCR.. 78
فصل چهارم. 80
4- 1- بررسی میزان کوتین در میوههای مختلف.. 81
4- 2- جداسازی سویهها 87
4- 3- بررسی فعالیت آنزیم کوتیناز در نمونهها 87
4- 4- نتایج بررسی کیفیت DNA بعد از استخراج. 88
4- 5- تجزیه و تحلیل تنوع ژنتیکی 6 سویه بر اساس نشانگر مولکولی RAPD.. 89
4- 6- نتایج حاصل از تجزیه خوشهای بر اساس نشانگر RAPD.. 89
4- 7- تجزیه به مختصات اصلی.. 90
4- 8- نتایج تجزیه باندهای حاصل از 8 پرایمر RAPD.. 92
4- 9- ضریب همبستگی کوفنتیک… 93
4- 10- شناسایی و توالی یابی سویهها با استفاده از 16S rDNA.. 93
فصل پنجم. 95
5- 1- استخراج کوتین.. 96
5- 2- سنجش فعالیت آنزیمی کوتیناز 97
5- 3- استخراج DNA.. 98
5- 4- تنوع ژنتیکی با استفاده از نشانگر RAPD.. 98
پیشنهادات.. 100
6- 1- پیشنهادات.. 101
فهرست جدول‌ها
جدول 2‑1 مطالعه ساختار- عملکرد کوتیناز به کمک تکنیکهای مختلف… 24
جدول 2‑2 فعالیت هیدرولازی کوتیناز نسبت به تنوع گستردهای از سوبستراها 29
جدول 2‑3 روشهای آمادهسازی کوتیناز 30
جدول 3‑1 مواد مورد استفاده در پایاننامه. 53
جدول 3‑2 مشخصات کامل مواد شیمیایی مورد نیاز در عملیات استخراج DNA… 61
جدول 3‑3 مواد مورد استفاده برای تهیه بافر TBE(10X) 68
جدول 3‑4 مشخصات پرایمرهای RAPD… 73
جدول 3‑5 مواد مورد نیاز PCR.. 75
جدول 3‑6 مواد مورد نیاز PCR با مستر میکس اماده 76
جدول 3‑7 برنامه واکنش PCR مورد استفاده برای نشانگر RAPD… 76
جدول 3‑8 برنامه واکنش PCR برای پرایمرهای 16S rDNA.. 77
جدول 3‑9 مواد مورد نیاز برای انجام PCR 6 نمونه با پرایمرهای16S rDNA.. 78
جدول3‑10 16S rDNA primer. 78
جدول 4‑1بررسی میزان کوتین.. 82
جدول 4‑2 بررسی میزان کوتین در خیارسبز. 83
جدول 4‑3 بررسی میزان کوتین در سیب زرد. 84
جدول 4‑4 بررسی میزان کوتین در سیب قرمز. 85
جدول 4‑5 تجزیه واریانس وزن کوتین نهایی بین میوهها 85
جدول4‑6 مقایسه میانگین میوهها به روش دانکن در سطح احتمال 1% برای صفت وزن کوتین نهایی.. 86
جدول 4‑7 فعالیت کوتینازی 6 نمونه. 88
جدول 4‑8 نتایج پرایمرهای RAPD حاصل از الکتروفورز افقی نمونهها 89
فهرست شکل‌ها
شکل 2‑1 ترسیم نمای ساختمان پوستک گیاه A) مرحله گستردگی کامل برگ B) تصویری با میکروسکوپ الکترونی از پوستک برگ بزرگنمایی 51000 برابر. 9
2‑2 مولکول کوتین و مونومرهایی که از هیدرولیز آن بدست می آید. 10
شکل 2‑3 نمایش شماتیکی از کوتیکول.. 11
شکل 2‑4 a) ساختمان غیر مشخص و بینظم کوتیکول با میکروسکوپ الکترونی b) برآمدگیهای کوتین میوه گوجهفرنگی با میکروسکوپ الکترونی.. 11
شکل 2‑5 a) توالی پروتئینی آنزیم کوتیناز b) مکانیسم عمل آنزیم کوتیناز 16
شکل 2‑6 هیدرولاز آلفا و بتا 20
شکل 2‑7 ساختار کوتیناز 21
شکل 2‑8 توانایی تجزیه (a) و سنتز(b) ترکیبات پلی استری توسط آنزیم کوتیناز 28
شکل2‑9 مکانیسم عمل کوتیناز 40
2‑10 گسترهی مقاومت آنزیم کوتیناز در برابر دما وpH 41
شکل 2‑11نمودار دما و pH… 41
شکل 2‑12 دستهبندی نشانگرهای ژنتیکی.. 44
فرم در حال بارگذاری ...
|
[سه شنبه 1399-10-09] [ 05:49:00 ب.ظ ]
|
