1-6- تشکیل فیبرین و سیستم فیبرینولایتیک……………………………………………………………. 15

 

1-7- هموستاز و سرطان…………………………………………………………………………………….. 18

 

1-8- ترومبوز و سرطان……………………………………………………………………………………… 20

 

1-9- ترومبین………………………………………………………………………………………………… 21

 

1-9-1- ارتباط پلی مورفیسم PT G20210A و خطر ابتلاء به سرطان و ترومبوز……….. 22

 

1-10- فیبرینوژن……………………………………………………………………………………………… 23

 

1-10-1- ارتباط پلی مورفیسم FGB-455G/A و خطر ابتلاء به سرطان و ترومبوز…….. 24

 

1-11- بازدارنده ی فعال كننده پلاسمینوژن1 (PAI-1)…………………………………………….. 25

 

1-11-1- ارتباط پلی مورفیسم PAI-1 (4G/5G)و خطر ابتلاء به سرطان و ترومبوز……. 27

 

1-12- اهدف …………………………………………………………………………………………………. 28

 

فصل دوم: مواد و روش ها

 

2-1- مقدمه……………………………………………………………………………………………………. 30

 

2-2- مواد و وسایل لازم جهت انجام آزمایشهای مولکولی ………………………………………… 31

 

2-3- استخراج DNA از خون…………………………………………………………………………… 33

 

2-4- بررسی کیفیت و کمیت ژنوم استخراج شده …………………………………………………….. 34

 

2-4-1- تعیین کیفیت و کمیت ژنوم با استفاده از دستگاه اسپكتروفتومتر نانودراپ …………. 34

 

2-4-2- تعیین میزان کیفیت ژنوم با استفاده از الکتروفورز ……………………………………….. 36

 

2-5- واكنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) ……………………………………………………………….. 37

 

 

2-5-1- مراحل PCR …………………………………………………………………………………… 37

 

2-6- روش تکثیر متزلزل جهش ها(ARMS-PCR)  …………………………………………….. 39

 

2-7- کنترل داخلی……………………………………………………………………………………………… 41

 

2-8- تهیه مخلوط PCR ………………………………………………………………………………….. 42

 

2-9- الكتروفورز……………………………………………………………………………………………… 46

 

2-9-1- الكتروفورز بر روی ژل آگارز………………………………………………………………… 46

 

2-9-2- مواد مورد نیاز برای الكتروفورز با ژل آگارز………………………………………………. 47

 

2-10- الكتروفورز ژل آگارز بر روی محصولات PCR مورد مطالعه …………………………… 48

 

2-11- عكس برداری از ژل………………………………………………………………………………… 49

 

2-12- آنالیز آماری داده ها…………………………………………………………………………………. 49

 

فصل سوم: نتایج

 

3-1- مقدمه …………………………………………………………………………………………………… 51

 

3-2- اطلاعات مربوط به بیماران میوم رحمی و افراد سالم…………………………………………. 52

 

3-3- بررسی یک عامل خطر در جمعیت مورد مطالعه ……………………………………………… 52

 

3-3-1- رابطه بین سن و خطر ابتلاء به میوم رحمی………………………………………………. 52

 

3-4-  بررسی پلی مورفیسم های مورد مطالعه و خطر ابتلاء به میوم رحمی …………………… 54

 

3-4-1-  بررسی پلی مورفیسم  G20210Aدر پروموتر ژن پروترومبین ………………….. 54

 

3-4-1-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PT G20210A ………………………… 55

 

3-4-2-  بررسی پلی مورفیسم -455G/A  FGB………………………………………………. 58

 

3-4-2-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم -455G/A FGB ………………………. 59

 

3-4-3-  بررسی پلی مورفیسم PAI-1 (4G/5G) ……………………………………………… 62

 

3-4-3-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PAI-1 (4G/5G) ……………………… 63

 

فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری

 

4-1- مقدمه …………………………………………………………………………………………………… 67

 

4-2- بحث …………………………………………………………………………………………………… 68

 

4-2-1- بررسی ارتباط بین سن و خطر ابتلاء به میوم رحمی……………………………………. 68

 

4-2-2- ارتباط پلی مورفیسم های مورد مطالعه و خطر ابتلاء به سرطان………………………. 68

 

4-2-2-1- ارتباط پلی مورفیسم PT G20210A و خطر ابتلاء به سرطان …………….. 68

 

4-2-2-2- ارتباط پلی مورفیسم FGB-455G/A و خطر ابتلاء به سرطان …………….. 69

 

4-2-2-3- ارتباط پلی مورفیسم  PAI-1 (4G/5G)و خطر ابتلاء به سرطان ………….. 70

 

4-2-3- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم های مورد مطالعه ………………………………… 71

 

4-2-3-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PT G20210A ………………………… 71

 

4-2-3-2- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم FGB-455G/A ……………………….. 73

 

4-2-3-3- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PAI-1-675 (4G/5G) ……………… 74

 

 

4-3- نتیجه گیری ……………………………………………………………………………………………. 76

 

4-4- پیشنهادات……………………………………………………………………………………………… 77

 

فهرست منابع و مأخذ ……………………………………………………………………………………….. 78

 

منابع فارسی ……………………………………………………………………………………………………. 78

 

منابع غیر فارسی…………………………………………………………………………………………………. 78

 

چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………… 92

 

فهرست جداول

 

جدول2-1: مواد لازم جهت آزمایشهای مولکولی………………………………………………………… 31

 

جدول2-2: دستگاه و وسایل لازم جهت آزمایشهای مولکولی………………………………………… 32

 

جدول2-3: توالی آغازگرهای به کار رفته در روش ARMS-PCR………………………………. 40

 

جدول2-4: توالی آغازگرها، به منظور کنترل داخلی……………………………………………………… 41

 

جدول2-5: غلظت نهایی اجزای واکنش PCR به منظور تکثیر ژن  PT G20210A………… 43

 

جدول2-6: غلظت نهایی اجزای واکنش PCR به منظور تکثیر ژن FGB-455G/A…………. 43

 

جدول2-7: غلظت نهایی اجزای واکنش PCR به منظور تکثیر ژن (4G/5G)  PAI-1-675 44

 

جدول2-8: برنامه PCR جهت تكثیر ژن فاكتور II…………………………………………………….. 44

 

جدول2-9: برنامه PCR جهت تكثیر ژن β- فیبرینوژن……………………………………………….. 45

 

جدول2-10: برنامه PCR جهت تكثیر ژن PAI-1……………………………………………………. 45

 

جدول3-1: اطلاعات مربوط به بیماران میوم رحمی و افراد سالم…………………………………….. 52

 

جدول3-2: درصد فراوانی بیماری در گروه های مختلف سنی……………………………………….. 53

 

جدول3-3: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه G20210A PT و خطر ابتلاء به میوم رحمی….. 55

 

جدول3-4: تجزیه و تحلیل آللی و ژنوتیپی پلی مورفیسم G20210A PT ……………………. 56

 

جدول3-5: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه G20210A PT در دو گروه بیمار و شاهد…….. 57

 

جدول3-6: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه -455G/A FGB و خطر ابتلاء به میوم رحمی… 59

 

جدول3-7: تجزیه و تحلیل آللی و ژنوتیپی پلی مورفیسم FGB-455G/A …………………… 60

 

جدول3-8: توزیع ژنوتیپی وآللی در ناحیه -455G/A FGB در دو گروه بیمار و شاهد…….. 61

 

جدول3-9: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه 4G/5G ژن PAI-1 و خطر ابتلاء به میوم رحمی 63

 

جدول3-10: تجزیه و تحلیل آللی و ژنوتیپی پلی مورفیسم PAI-1-675 (4G/5G)  ……… 64

 

جدول3-11: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه 4G/5G ژن PAI-1 در دو گروه بیمار و شاهد 65

 

جدول4-1: توزیع آللی پلی مورفیسم PT G20210A در جمعیت های مختلف …………….. 72

 

جدول4-2: توزیع آللی پلی مورفیسم FGB-455G/A در جمعیت های مختلف …………….. 74

 

جدول4-3: توزیع آللی پلی مورفیسم PAI-1-675 (4G/5G) در جمعیت های مختلف ….. 75

 

فهرست نمودارها

 

نمودار3-1: با افزایش سن احتمال ابتلاء به میوم رحمی افزایش یافته است…………………………………. 53

 

فهرست شکل ها

 

شکل1-1: محل قرار گیری میوم ها در رحم……………………………………………………………….. 7

 

شکل1-2: نمودار طرح واره هموستاز ……………………………………………………………………… 14

 

شكل1-3: تشكیل لخته فیبرین……………………………………………………………………………….. 16

 

شكل1-4: فیبرینولایز…………………………………………………………………………………………… 17

 

1-2-1-6- ارزش اقتصادی……………………………………………………………………………………………………………………………..    11

 

1-3- باکتری های لاکتیکی ………………………………………………………………………………………………………………………….    11

 

1-3-1- نقش باکتری های اسید لاکتیک در صنایع غذایی ………………………………………………………………………..    13

 

1-3-2- متابولیسم باکتری های اسید لاکتیک ……………………………………………………………………………………………    14

 

1-3-2-1- باکتری های اسید لاکتیک هموفرمنتاتیو (همگن)…………………………………………………………………….    14

 

1-3-2-2- باکتری های اسید لاکتیک هتروفرمنتاتیو (ناهمگن)…………………………………………………………………   15  1-4- لاکتوباسیل ها…………………………………………………………………………………………………………………………………………  17

 

1-5- طبقه بندی لاکتوباسیل ها……………………………………………………………………………………………………………………..  18

 

1-6- تاریخچه ی لاکتوباسیل ها …………………………………………………………………………………………………………………….  19

 

1-7- محصولات . ……………………………………………………………………………………………………………………………………………..  20

 

1-7-1- پنیر ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………  20

 

1-7-1-1- انواع پنیر ………………………………………………………………………………………………………………………………………  20

 

1-7-1-2- ارزش غذایی پنیر………………………………………………………………………………………………………………………….   20

 

1-7-2- ماست ……………………………………………………………………………………………………………………………………………….   21

 

1-8- باکتریوفاژ ………………………………………………………………………………………………………………………………………………   22

 

1-8-1- نقش باکتریوفاژ در صنایع لبنی شیر ………………………………………………………………………………………………   24

 

1-8-1-2- منابع اصلی آلودگی فاژی در کارخانجات صنایع لبنی ……………………………………………………………….  24

 

1-8-3- اثر باکتریوفاژها …………………………………………………………………………………………………………………………………  24

 

1-8-4- تاریخچه کشف باکتریوفاژ ……………………………………………………………………………………………………………….  25

 

1-8-5- مورفولوژی باکتریوفاژ ها ………………………………………………………………………………………………………………… 26

 

1-8-6- طبقه بندی باکتریوفاژ ……………………………………………………………………………………………………………………..  28

 

1-8-7- مراحل ورود و تکثیر باکتریوفاژ ……………………………………………………………………………………………………….  30

 

1-8-7-1- مرحله جذب فاژ بر روی سلول باکتری ………………………………………………………………………………………  30

 

1-8-7-2- مرحله ورود فاژ به داخل باکتری ………………………………………………………………………………………………..  31

 

1-8-7-3- بیوسنتز ……………………………………………………………………………………………………………………………………….  31

 

1-8-7-4- رسیدگی کامل ……………………………………………………………………………………………………………………………  31

 

1-8-8- منشا فاژ …………………………………………………………………………………………………………………………………………..  32

 

1-8-9- سیکل حیاتی فاژ …………………………………………………………………………………………………………………………….  32

 

1-8-9-1- سیکل لیتیک    ………………………………………………………………………………………………………………………..  32

 

1-8-9-2- سیکل لیزوژنیک …………………………………………………………………………………………………………………………  32

 

1-8-10- روش جداسازی فاژ ………………………………………………………………………………………………………………………  34

 

1-8-10-1- روش مستقیم ………………………………………………………………………………………………………………………….  34

 

1-8-10-1-1-روش های میکروبیولوژی …………………………………………………………………………………………………….  34

 

1-8-10-1-2- روش مولکولی …………………………………………………………………………………………………………………….  34

 

1-8-10-2 روش غیر مستقیم سنتی ………………………………………………………………………………………………………….  35

 

1-8-10-2-1- تست فعالیت ………………………………………………………………………………………………………………………  35

 

1-8-10-2-2- تست اندیکاتور …………………………………………………………………………………………………………………..  35

 

1-8-10-2-3- فلوسایتومتری ……………………………………………………………………………………………………………………  35

 

1-8-10-2-4- امپدانس الکتریکی یا رسانایی شیر …………………………………………………………………………………..  35

 

1-8-10-2-5- سنجش پلاک – لکه و رشد – توربیدومتری …………………………………………………………………….  36

 

1-8-10-2-6- انواع PCR  …………………………………………………………………………………………………………………………  37

 

1-8-10-2-6-1- …..Mutiplex PCR……………………………………………………………………………………………………….  37

 

1-8-10-2-6-2- Quntitive PCR………………………………………………………………………………………………………….  37

 

1-8-10-2-6-3- Traditional PCR  …………………………………………………………………………………………………….  38

 

1-8-11- کنترل فاژ …………………………………………………………………………………………………………………………………….  38

 

1-9- مقاومت انتی بیوتیک ………………………………………………………………………………………………………………………….  40

 

1-9-1- مقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل های پروبیوتیک ……………………………………………………………………..  42

 

1-9-2- انواع مقاومت  آنتی بیوتیک …………………………………………………………………………………………………………..  43

 

1-9-3- انتقال ژن های افقی لاکتوباسیل های پروبیوتیک ……………………………………………………………………….. 43

 

1-9-4- عوام ضد باکتریایی………………………………………………………………………………………………………………………….. 43

 

1-9-4-1- آنتی بیوتیک ها………………………………………………………………………………………………………………………….. 45

 

1-9-5- مکانیسم آنتی بیوتیک ها ………………………………………………………………………………………………………………  45

 

1-9-5-1- آنتی بیوتیک ها ی ممانعت کننده از سنتز دیواره سلول…………………………………………………………   47

 

1-9-5-1-1- آنتی بیوتیک های بتالاکتام …………………………………………………………………………………………………  48

 

 

1-9-5-2- مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک بتالاکتام …………………………………………………………………………………  48

 

1-9-5-2-1- پنی سیلین ها ……………………………………………………………………………………………………………………..  49

 

1-9-5-2-2- سفالوسپورین ها و سفامایسین ها ………………………………………………………………………………………..  50

 

1-9-5-2-3- گلیکوپپتیدها ………………………………………………………………………………………………………………………..  51

 

1-9-5-2-4- پلی پپتید ها ………………………………………………………………………………………………………………………..  51

 

1-9-5-2-5- ایزونیازید، اتیونامید، اتامبتول و سیکلوسرین ……………………………………………………………………… 52

 

1-9-5-3- انتی بیوتیک های مهار کننده سنتز پروتئین ………………………………………………………………………….. 52

 

1-9-5-3-1- آمینوگلیکوزید ها …………………………………………………………………………………………………………………  52

 

1-9-5-3-2- تتراسایکلین ……………………………………………………………………………………………………………………….   54

 

1-9-5-3-2-1- مقاومت به تتراسایکلین …………………………………………………………………………………………………   54

 

1-9-5-3-3- اگزازولیدین ………………………………………………………………………………………………………………………..   54

 

1-9-5-3-4- کلرامفنیکل …………………………………………………………………………………………………………………………  55

 

1-9-5-3-5- ماکرولیدها …………………………………………………………………………………………………………………………..  55

 

1-9-5-3-5-1- مقاومت به ماکرولید ها ………………………………………………………………………………………………….  55

 

1-9-3-6- کلیندامایسین …………………………………………………………………………………………………………………………. 56

 

1-9-3-7- استرپتوگرامین ………………………………………………………………………………………………………………………  56

 

1-9-5-4- آنتی بیوتیک های مهار کننده اسید نوکلوئیک ………………………………………………………………………. 57

 

1-9-5-4-1- کینولون ها ………………………………………………………………………………………………………………………….  57

 

1-9-5-4-2- ریفامپین و ریفابوتین ………………………………………………………………………………………………………..   57

 

1-9-5-4-3- مترانیدازول ………………………………………………………………………………………………………………………..   58

 

1-9-5-4-4- آنتی متابولیت ها ………………………………………………………………………………………………………………..  58

 

1-9-6-1- اهمیت مقاومت آنتی بیوتیک ها در دام …………………………………………………………………………………  59

 

فصل دوم: مروری بر متون گذشته

 

2-1- تاریخچه …………………………………………………………………………………………………………………………………………..  62

 

2-2- مطالعات انجام شده در باکتریوفاژ …………………………………………………………………………………………………..  62

 

2-3- مقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل ها …………………………………………………………………………………………….  64

 

فصل سوم: مواد و روش کار

 

3-1- دستگاه های مورد نیاز ……………………………………………………………………………………………………………………..  68

 

3-2- لوازم مورد نیاز …………………………………………………………………………………………………………………………………..  69

 

3-3- مواد مورد نیاز …………………………………………………………………………………………………………………………………….  69

 

3-4- سویه های میکروبی مورد مطالعه ……………………………………………………………………………………………………… 71

 

3-4-2- آماده سازی محیط های کشت ……………………………………………………………………………………………………..  71

 

3-4-2-1- محیط های کشت MRS  آگار ………………………………………………………………………………………………..  72

 

3-4-2-2- محیط های کشت نرم MRS  آگار …………………………………………………………………………………………  72

 

3-4-2-3- محیط کشت MRS  مایع ……………………………………………………………………………………………………….  72

 

3-5- کشت و آزمایشات تعین هویت باکتری  …………………………………………………………………………………………..  72

 

3-6- سنجش فاژ ………………………………………………………………………………………………………………………………………..  73

 

3-6-1- روش دو لایه ای پلاک …………………………………………………………………………………………………………………  73

 

3-6-2- مشاهده پلاک توسط القاء با پرتو UV ……………………………………………………………………………………….  73

 

3-6-3- آزمون Heap and Lawrence …………………………………………………………………………………………………  74

 

3-7- سنجش حساسیت نسبت به آنتی بیوتیک ………………………………………………………………………………………  75

 

3-7-2- آزمایش تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی به روش انتشار دیسک در آگار ( دیسک دیفیوژن) …..  76

 

3-7-2-1- روش انجام آزمایش دیسک گذاری ………………………………………………………………………………………   76

 

3-7-2-1-1- تهیه محیط کشت ……………………………………………………………………………………………………………   76

 

3-7-2-1-2- روش کار …………………………………………………………………………………………………………………………..  77

 

فصل چهارم : نتایج

 

4-1- شرح مختصری از مطالعه ……………………………………………………………………………………………………………….  80

 

4-2- نتایج ………………………………………………………………………………………………………………………………………………..  80

 

4-2-1- نتایج حضور یا عدم حضور فاژ در سویه ها …………………………………………………………………………………  81

 

4-2-2- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء  UV و میتومایسین C  ………………………………………….  83

 

4-2-3- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء با میتومایسین C و Heap and Lawrence  ………….. 83

 

4-2-4- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء با پرتو UV و Heap and Lawrence ……………………  84

 

4-3- نتایج حساسیت ومقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل ها …………………………………………………………………. 84

 

4-4- نتایج میزان درصد حساسیت و مقاومت سویه ها به آنتی بیوتیک …………………………………………………  91

 

4-5-1- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به آمینوگلیکوزید ها   92

 

4-5-2- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به سفالوسپورین ها ..  92

 

4-5-3- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به گلیکوپپتیدها …….  93

 

4-5-4- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به لینکوزامید ها …….  93

 

4-5-5- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به ماکرولیدها …………  94

 

4-5-6- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به پنی سیلین ها …..  94

 

4-5-7- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به کینولون ها ………..  95

 

4-5-8- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به سولفانامید ها ………  95

 

4-5-9- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به تتراسایکلین ها…….. 96

 

4-5-10- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به دیگر آنتی بیوتیک‌ها………………  96

 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری  

 

5-1- اهمیت جداسازی فاژ ……………………………………………………………………………………………………………………….   99

 

5-2- نتایج جستجو برای جداسازی فاژ ……………………………………………………………………………………………………  100

 

5-3- اهمیت الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی پروبیوتیک ها ……………………………………………………………………  102

 

5-4- راه های انتقال ژن های مقاومت به آنتی بیوتیکی در لاکتوباسیل ها …………………………………………….  103

 

5-5- نتایج تفسیر برای الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی …………………………………………………………………………   104

 

5-6- پیشنهادات ……………………………………………………………………………………………………………………………………….  109

 

منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….  111

 

ضمائم

 

پوسترهای ارائه شده در پانزدهمین کنگره بین المللی  میکروب شناسی ایران ……………………………………… 121

 

خلاصه انگلیسی ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 12۳

 

فهرست جداول

 

جدول 1-1- مورفولوژی باکتریوفاژهای اسید لاکتیک ………………………………………………………………………………  30

 

جدول 1-2- گروه های آنتی بیوتیکی و مکانیسم عمل آن ها ………………………………………………………………….  46

 

جدول 1-3- پنی سیلین ها و طیف اثر آن ها …………………………………………………………………………………………..  49

 

جدول 1-4- مثال های انتخابی از سفالوپورین ها و سفامایسین و طیف اثر آن ها ………………………………….  50

 

جدول 1-5- ماکرولیدها وتتراساسکلین …………………………………………………………………………………………………….  56

 

جدول1-6- کینولون ها …………………………………………………………………………………………………………………………….   57

 

جدول 3-1- دستگاه های مورد استفاده در تحقیق به همراه مدل آن ها ……………………………………………….  68

 

جدول 3-2- مواد مورد نیاز در آزماشی به همراه کشور سازنده آن ها …………………………………………………….  70

 

جدول 3-3- دیسک های آنتی بیوتیک مورد استفاده جهت آنتی بیوگرام در این مطالعه …………………….   75

 

جدول 4-1- نتایج حضور یا فقدان فاژ در سویه ها با استفاده از 3 روش مختلف …………………………………..  81

 

جدول 4-2- نتایج قطر هاله عدم رشد و الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی برای سویه های لاکتوباسیل بومی……….  85

 

جدول 4-3- میزان درصد حساسیت و مقاومت سویه های به آنتی بیوتیک …………………………………………..  91

 

فهرست شکل ها

 

شکل 1-1- روش تخمیر همولاکتیکی در باکتری های اسید لاکتیک …………………………………………………….. 16

 

شکل 1-2- تخمیر هترولاکتیکی باکتری های اسید لاکتیک ………………………………………………………………….  17

 

شکل 1-3- شمای کلی باکتریوفاژ ……………………………………………………………………………………………………………  23

 

شکل 1-4- سیکل حیاتی لیتیک و لیزوژنیک باکتریوفاژ …………………………………………………………………………  33

 

شکل 3-1- پلاک …………………………………………………………………………………………………………………………………….   74

 

شکل 3-2- اندازه گیری هاله عدم رشد ………………………………………………………………………………………………….  78

 

فهرست نمودارها

 

4-1- نمودار نتایج مقایسه 3 روش مختلف برای جداسازی فاژ ……………………………………………………………..  83

 

4-2-1- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به آمینوگلیکوزیدها ………. 92

 

4-2-2- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به سفالوسپورین ها……….  92

 

4-2-3- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به ونکومایسین ……………   93

 

4-2-4- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کلیندامایسین………….   93

 

4-2-5- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به اریترومایسین………….    94

 

4-2-6- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به پنی سیلین ها …………  94

 

4-2-7- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کینولون ها………………….95

 

2-5. راه های سرایت بیماری………………………………………………27

 

2-5-2. دوره نهفتگی………………………………………………………27

 

2-6. علائم بیماری…………………………………………………………….28

 

2-7-1.  تشخیص آزمایشگاهی بیماری………………………………………..29

 

-7-2.  انواع تست هاى سرولوژیك بروسلوز………………………………….33

 

2-7-2-1 تست آگلوتیناسیون داخل لوله ای استاندارد………………………………………33

 

2-7-2-2  تست آگلوتیناسیون ME2……………………………………………………….33

 

2-7-2-3. تست آنتی گلوبولین یا كمبس رایت………………………………………………34

 

2-7-2-4. تست فیكساسیون كمپلمان ( ثبوت مکمل )………………………………………34

 

2-7-2-5و6. تست های رادیوایمونواسی و ELISA…………………………………….34

 

2-7-2-7. تست رزبنگال………………………………………………………………….34

 

2-7-3. تشخیص بروسلوزیس بر اساس روش های مولکولی………….34

 

2-8. آنتی ژن های سطحی……………………………………………..35

 

2-8-1. لیپوپلی ساکارید(LPS  )…………………………………………35

 

2-8-2. پروتئین غشاء خارجی(OMP)………………………………….38

 

2-8-3. پورین های عمومی………………………………………………….41

 

2-9.  واکسن های بروسلوز………………………………………………42

 

2-9-1. واكسن های كونژوگه و طراحی آن ها……………………………………….49

 

2-9-1-2. انتخاب پروتئین حامل…………………………………………..50

 

2-9-1-1.  انتخاب پلی ساكارید…………………………………………………………..50

 

2-9-1-3.  نسبت پلی ساکارید به پروتئین………………………………….51

 

2-9-1-4. تهیه ی کونژوگه های ایمونوژن هاپتن–حامل…………………….51

 

2-9-1-5. پروتئین های حامل مناسب برای ایجاد کونژوگه های آنتی ژنیکی..52

 

2-9-1-6. ادجوانت های مناسب در طراحی واکسن کونژوگه………………..53

 

2-9-1-7. جفت شدگی شیمیایی ( اتصال) ……………………………………53

 

2-9-1-8. EDC یا EDAC …………………………………….54

 

2-9-1-9. آدپیک اسید دی هیدرازید …………………………………………55

 

2-9-1-10. كونژوگاسیون به شیوه آمیداسیون………………………………56

 

3-1. تهیه میکروارگانیسم مورد نظر……………………………………….58

 

3-2. باز کردن سوش لیوفریزه بروسلا آبورتوس……………………..58

 

3-3. کنترل سوش لیوفیلیزه از نظرRough و Smooth بودن……..59

 

3-4. تهیه بیوماس سلولی………………………………………………….60

 

3-5. استخراج و تخلیص LPS بروسلا آبورتوس S99……………….61

 

3-5-1. د تو کسیفیه کردن LPS با روش قلیایی…………………………..63

 

3-5-2. آزمون Novotny…………………………………………………..63

 

3-6. استخراج و خالص سازی Omp بروسلا آبورتوس RB51……………64

 

3-6-2. اندازه‌گیری پروتئین با روش لوری…………………………………..65

 

3-7. کونژوگاسیون Omp و LPS بروسلا آبورتوس………………………..68

 

3-8. ستون کروماتوگرافی برای تخلیص کونژوگه………………………..69

 

3-8-1. مراحل پک کردن ستون کروماتوگرافی……………………….69

 

3-9. آزمون کنترل کیفی کونژوگه………………………………………71

 

3-9-1. کنترل تب زایی در خرگوش(in vivo test)……………………71

 

3-9-2. کنترل توکسیسیته غیر عادی(Abnormal Toxicity)………..72

 

3-10. واکسیناسیون  و سنجش ایمنی زایی کونژوگه……………………..72

 

3-11. آزمون بررسی فعالیت باکتری کشی سرم حیوان(سرم باکتریسیدال اسیSBA)……..73

 

3-11-1. اصول آزمون SBA……………………………………………74

 

 

4-1. تعیین میزان LPS خام در نمونه استخراج شده با آزمون نووتنی……77

 

4-2. تعیین غلظت پروتئین در نمونه Omp بروسلا آبورتوس RB51 به روش لوری………….80

 

4-3. نتایج کنترل کیفی کونژوگه……………………………………….81

 

4-6. نتایج بررسی کنترل توکسیسیته غیر عادی(Abnormal toxicity)..82

 

4-5. نتایج کنترل تب زایی در خرگوش (in vivo test)………………..82

 

4-7. ارزیابی فعالیت باکتری کشی سرم باکتریوسیدال اسی(SBA)…………..83

 

فهرست شکل ها

 

شکل(2-1)- عفونت دریچه قلب توسط B.abortus ……………….12

 

شکل(2-2)بروسلا آبورتوس دارای منشاء گاوی…………………………………………..21

 

شکل(2-3) بروسلا سوئیس دارای منشاء خوک……………………………………………..22

 

شکل(2-4) بروسلا سوئیس دارای منشاء موش صحرایی………………………………….23

 

شکل(2-5) بروسلا سوئیس دارای منشاء پستانداران دریایی……………………………….24

 

شکل(3-1) کنترل سوش RB51 با استفاده از اکروفلاوین………………………………..60

 

2-1)تاریخچه ……………………………………………………………………………………………………………….7

 

2-2)بلاغت‌درادبیات‌عرب……………………………………………………………………………………………….7

 

فصل سوم  :روش تحقیق……………………………………………………………………………………………..50

 

فصل چهارم: یافته ها…………………………………………………………………………………………………51

 

4-1)درآمد………………………………………………………………………………………………………………..52

 

4-2)تحلیل صنایع بدیعی حافظ……………………………………………………………………………………..53

 

4-3)جدول و نمودار    ……………………………………………………………………………………………….225

 

فصل پنج  نتیجه گیری…………………………………………………………………………………………………227

 

چكیده………………………………………………………………………………………………………………………230

 

منابع…………………………………………………………………………………………………………………………231

 

پیشگفتار

 

الهی از دودعوی به زینهارم و زهردو به فضل تو فریاد خواهم:ازآن که پندارم که با خود چیزی دارم یاپندارم که بر تو حقی دارم.

 

با حمد و سپاس بر ذات لایزال خداوندکه به بندگانش درس معرفت و سپاس گزاری آموخت وباگشودن درهای دانش وبینش ،زمینه رابرای رهایی ورستگاری آنان فراهم نمود .

 

حرفهای تازه، مضمونهای بی سابقه، و اندیشه هایی که رنگ اصالت و ابتکار دارد در کلام حافظ همه جا موج می زند. حتی عادی ترین اندیشه ها نیز در بیان او رنگ تازگی دارد. این تازگی بیان، در بعضی موارد نتیجه ی یک نوع صنعتگری مخفی است. مناسبات لفظی البته شعر وی را رنگ ادیبانه می دهد و آشنایی با لغت و علوم بلاغت وی را در این کار قدرت بیشتر می بخشد. مراعات نظیر هم لطف و ظرافتی به کلام او می افزاید. وقتی بخاطر می آورد که زلف معشوق را عبث رها کرده است، این را یک دیوانگی می بیند و حس می کند که با چنین دیوانگی هیچ چیز برای او از حلقه ی زنجیر مناسبتر نیست. با چه قدرت و مهارتی این الفاظ را در یک بیت آورده است! جایی که از دانه ی اشک خویش سخن می گوید به یاد مرغ وصل می افتد، و آرزو می کند که کاش این مرغ بهشتی به دام وی افتد. یک جا در خلوت یک وصل بهشتی از معاشران می خواهد، گره از زلف یار باز کنند و به مناسبت زلف یار که در تیرگی و پریشانی رازناک خود به یک قصه می ماند

 

هرچند فراوان دربارۀ حافظ سخن گفته اند ،ولی هنوز ناگفته ها ی بسیار درپرده است وهیچ کس آن گونه که شایسته است، به طور کامل نتوانسته به عمق اندیشه های شاعرانه وعرفانی اودست یابد وازآن رند مست لا ابالی جزبی نشانی ،نشانی به دست دهد؛کسی که با اندیشه های آسمانی والهامات غیبی خود چنان بادۀ عشقی ازمیخانه الهی به عاشقان وروندگان کوی دوست چشاند که علم بی خبر افتادوعقل بی حس شد.دربارۀ زندگی خانوادگی حافظ اطلاعات محدودی دردست است.چنان که دربارۀ عشق اوبه دختر ی به نام شاخ نبات افسانه هایی رایج است که براساس همان داستان ها حافظ آن دختر رابه عقد مزاوجت خود درآورد.

 

غزل حافظ شعری است لطیف ،صاف ،تراش خورده وجلا یافته که درآن گاهی اوضاع زمانه منعکس می شود وگاه احوال وسرگذشت شاعر.منبع عمدۀ اندیشه های حافظ غیر از دل حساس وذوق آفریننده شاعر ،مطالعه کتاب است .لطف بیان وایجاز وایهام را از قرآن وتفاسیر آن آموخته است وباریک اندیشی ودقت نظر را از آثار حکما ومتکلفان .

 

ازاین روی برتلاش برآمدم تابه توفیق الهی وبامددگرفتن ازاستادارجمندجناب آقای دکتراسفندیارپورموضوع بلاغت درصدغزل حافظ رابرگزینم .پس ازتصویب موضوع وباراهنمایی های استاد بزگوار وبا شوق فراوان به گردآوری مطالب پرداختم .روش وکاراین پژوهش به صورت مطالعات کتابخانه ای می باشد.ابتدا دیوان حافظ راتهیه کرده وسپس غزلیات راازشماره صدتادویست انتخاب کرده وصناعات ادبی هریک ازغزلیات رامعرفی کردم .دراین زمینه ازکتابهای اندیشمندانی چون:فنون وبلاغت جلال الدین همایی ،معانی وبیان محمدعلوی مقدم،بیان ومعانی سیروس شمیسا،زیباشناسی سخن ازمیرجلال الدین کزازی ،دیوان حافظ تصحیح قاسم غنی وحافظ نامه بهاالدین خرمشاهی بهره برده ام .

 

به طورکلی پژوهش حاضردرپنج فصل.تدوین شده است.

 

فصل اول:این فصل شامل کلیات ،بیان مسئله،اهمیت تحقیق و اهداف تحقیق می باشد .

 

فصل دوم: این فصل شامل پیشینه و سوالات و فرضیات مربوط به پایان نامه می باشد.

 

فصل سوم :این فصل شامل روش تحقیق می باشد.

 

 

فصل چهارم:شامل یافته ها است

 

فصل پنجم:این فصل شامل نتیجه گیری است

 

درپایان برخود فرض میدانم که مراتب سپاسگزاری خویش راازاستاد بزرگوار سرکار خانم دکتر صدیقه علیپورداشته باشم وهمچنین تشکرفراوان دارم ازجناب آقای دکتر هوشمند اسفندیار پورکه مشاوره پایان نامه اینجانب رابرعهده داشته اند.

 

1-9-1- تقسیم بندی انواع لوسمی.. 18

 

1-9-2- همه گیر شناسی (مطالعات اپیدمیولوژیک).. 19

 

1-9-3- اتیولوژی.. 19

 

1-10- ساختار سیستم دفاعی بدن.. 20

 

1-10-1- سلولهای دفاعی.. 20

 

1-10-2- ماکروفاژها.. 22

 

1-11- عامل حساسیت به بیماریهای پیچیده.. 25

 

1-12- انواع تنوع بین ژنومهای انسانی.. 27

 

1-12-1- چند شکلیهای تک نوکلئوتیدی از نظر تعداد فراوانترین نوع تنوع ژنتیکیاند.. 27

 

1-12-2- چند شکلیهای تک نوکلئوتیدی.. 28

 

1-12-3- انواع چند شکلی تک نوکلئوتیدی.. 29

 

1-12-4- اهمیت و کاریرد چند شکلی تک نوکلئوتیدی.. 29

 

1-13- ویتامین D.. 30

 

1-13-1- متابولیسم ویتامین D.. 30

 

1-13-2- نقش ویتامین D.. 34

 

1-14- پروتئین GC.. 34

 

فصل 2: مروری بر تحقیقات انجام شده   38

 

فصل 3: مواد و روش ها   46

 

3-1- جامعه مورد مطالعه.. 46

 

3-2- نمونه گیری.. 46

 

3-2-1- ضد عفونی کردن محل نمونه گیری.. 47

 

3-2-2- روش نمونه گیری.. 47

 

3-2-3- کورسازی نمونه ها.. 48

 

3-3- جمع آوری اطلاعات بیماران و افراد کنترل.. 48

 

3-4- ملاحظات اخلاقی.. 49

 

3-5- آمادهسازی بافیکوت برای استخراج DNA.. 49

 

3-6- جداسازی بافی کوت.. 50

 

3-7- استخراج DNA.. 51

 

3-7-1- استخراج DNA به روش فنل کلروفرم.. 51

 

. 53

 

3-7-3- آماده سازی نمونه.. 54

 

3-7-4- پروتکل آزمایش.. 54

 

3-8- تعیین خلوص DNA.. 56

 

3-8-1- استفاده از اسپکتروفتومتر و قرائت OD.. 56

 

3-8-2- الکتروفورز روی آگارز 1%.. 56

 

3-9- حفظ و نگهداری DNA.. 57

 

3-10- واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR).. 57

 

3-10-1- نگاهی کلی بر واکنش زنجیره ای پلیمراز.. 57

 

3-11- طراحی پرایمر برای PCR.. 59

 

3-11-1- نکاتی که در طراحی پرایمر مد نظر داشتیم.. 59

 

3-11-2- غلظت‌ پرایمرها و روش‌ اندازه‌گیری‌ آن.. 61

 

3-11-3- بسط‌ پرایمر.. 61

 

3-11-4- طراحی پرایمر با نرم افزار.. 61

 

3-12- تعیین دمای صحیح برای استفاده در PCR.. 62

 

3-13- دزوکسی نوکلئوتید تری فسفات (dNTP).. 63

 

3-14- DNA پلیمراز مقاوم به حرارت.. 64

 

64

 

3-16- بافر PCR.. 64

 

3-17- مراحل انجام PCR.. 65

 

3-17-1- وسایل و مواد مورد نیاز.. 65

 

3-17-2- روش انجام PCR.. 65

 

3-18- الکتروفورز.. 67

 

3-18-1- بافر TBE.. 67

 

 

3-18-2- بافر بارگذاری یا بافر نشانگر.. 68

 

3-18-3- منبع تغذیه الکتروفورز.. 68

 

3-18-4- مواد و وسایل لازم برای الکتروفورز محصولات PCR   69

 

3-18-5- طرز تهیه اتیدیوم بروماید mg/ml10.. 69

 

3-18-6- طرز تهیه محلول سایبرگرین.. 70

 

3-18-7- آماده ساختن سایز مارکر (Fermentas).. 70

 

3-18-8- تهیه ژل آگارز 1% و الکتروفورز محصولات PCR   71

 

3-18-9- شرایط تعیین توالی در انستیتوپاستور.. 72

 

3-19- توالی یابی ژن ها و ژنوم ها.. 72

 

3-19-1- شناخت روش های توالی یابی.. 73

 

3-20- نحوه مقایسه توالی محصول PCR در بانک ژنی.. 75

 

فصل 4: نتایج و بحث   78

 

4-1- نتایج حاصل از جمع آوری نمونه ها.. 78

 

4-2- نتایج حاصل از کنترل پروسه استخراج.. 79

 

4-3- نتایج حاصل از کنترل فرآیند PCR.. 80

 

4-4- نتایج حاصل از توالی یابی.. 81

 

4-5- ارزیابی کلی.. 86

 

فصل 5: نتیجه گیری   87

 

1-5- بحث پیرامون ژنوتایپ بیماران در برابر افراد سالم   87

 

5-2- نتیجه گیری.. 94

 

5-3- پیشنهادات.. 94

 

فصل 6: منابع   95

 

چکیده

 

سابقه و هدف: پروتئین GC (جزء گروه خاصی از پروتئین‌های انسانی، یک پروتئین متصل شونده به ویتامین D یا GC گلوبولین) که در عملکرد فیزیولوژیکی مهم بدن شامل تکامل، انتقال، ذخیره ویتامین D، مهار و به دام انداختن G- اکتین خارج سلولی، افزایش فعالیت کموتاکسی C5^α  در التهاب نوتروفیلی و فعالیت ماکروفاژی نقش دارد. در بسیاری از مطالعات امروزه برای تعیین نقش پروتئین Gc، توجهات به سمت تعیین انواع پلی مورفیسم‌های این پروتئین بوده تا بتوان با مقایسه غلظت انواع مختلف از این پروتئین در بدخیمی‌های مختلف، ارتباط معناداری بین این دو پیدا گردد. این مطالعه با هدف بررسی پلی مورفیسم‌های ژن بیان کننده ویتامین D با بروز سرطان (ALL) در کودکان در استان زنجان انجام گردید.

 

مواد و روش­ها: با کمک کادر مجرب بیمارستان آیت­ا… موسوی بعنوان تنها مرکز تخصصی انکولوژی استان زنجان، نمونه­گیری انجام شد. نمونه ها جهت جداسازی بافی­کوت و تخلیص DNA با استفاده از روش کیت تجاری، به آزمایشگاه منتقل شد. پس از تخلیص، PCR انجام شد و نمونه ها جهت توالی یابی ارسال گردید. پس از مقایسه توالی کودکان بیمار و کودکان سالم با یکدیگر و با الگوهای موجود در پایگاه داده ها، اقدام به شناسایی پلی مورفیسم ها گردید.

 

نتایج: ژنوتایپ­های Gc1S/1S در افراد بیمار 20% و درافراد کنترل23.1%، Gc1F/1S در افراد بیمار 40% و در افراد کنترل 61.5%، Gc1F/1F در افرادبیمار صفر درصد و در افراد کنترل 7.7%، Gc2/2 در افراد بیمار 6.7% و در افراد کنترل 7.7%، Gc1S/2در افراد بیمار33.3% و در افراد کنترل صفر درصد و Gc1F/2 هم در افراد کنترل و هم در افراد بیمار صفر درصد مشاهده گردید.

 

بحث و نتیجه­گیری: بسیار واضح و کاملا شناخته شده است که نقش پروتئین GC به عنوان یک پروتئین پیشساز فعال کننده ماکروفاژ (MAF) در رخداد و جلوگیری از بسیاری از بیماری ها بخصوص بسیاری از عفونت ها و بدخیمی ها حائز اهمیت می باشد.

 

با توجه به این‌که ارتباط معناداری بین انواع ژنوتایپ ها و فنوتایپ های این پروتئین با رخداد بیماری وجود ندارد، لیکن می توان گفت مطالعات وسیعتر و البته دقیقتری در این زمینه مورد نیاز است.

 

کلمات کلیدی: پلی­مورفیسم، ALL، Gc، ماکروفاژ

 

مقدمه

 

سرطان

 

سرطان[1] شامل گروه بزرگ و ناهمگنی از بیماری‌هاست که با تکثیر کنترل نشده سلول‌ها مشخص می‌شود (Alipoor A. and Noorbala A.A, 2004). برخی محققین، سرطان به معنی تقسیم کنترل نشده سلول‌ها را معادل بیماری که پایان طبیعی یک موجود چند سلولی باشد، نمی‌دانند. سرطان به این علت ایجاد می‌شود که سلول‌های سوماتیک تغییرات ژنتیکی را کسب می‌کنند که به آن‌ها شش ویژگی زیر را نسبت می‌دهند: