2-1 مقدمه:. 14

 

2-2بازاریابی:. 14

 

2-3مدیریت بازاریابی:. 14

 

2-4 بازاریابی خدمات:. 15

 

2-4-1ویژگی های انحصاری خدمات:. 15

 

2-5 اینترنت:. 16

 

2-6 تجارت الکترونیک. 17

 

2-6-1 مفهوم تجارت الکترونیک:. 17

 

2-6-2 تاریخچه تجارت الکترونیکی:. 18

 

2-6-3 مزایای ایجاد تجارت الکترونیکی. 23

 

2-6-4 معایب تجارت الکترونیکی. 25

 

2-7 زیر ساختهای لازم برای گسترش تجارت الکترونیکی در ایران:  26

 

2-8 تعریف بانک:. 27

 

2-9 چگونگی پیدایش بانکداری در ایران:. 28

 

2-10 تعاریف و مفاهیم بانکداری الکترونیک:. 34

 

2-10-1 مزایای بانکداری الکترونیکی. 35

 

2-10-1-1 مزایای بانکداری الکترونیک از دیدگاه بانک ها. 36

 

2-10-2 بانکداری الکترونیکی در ایران. 37

 

2-10-3 تحولات بانکداری الکترونیکی. 38

 

2-10-4 ضرورت بانکداری الکتریکی:. 39

 

2-10-7 زیر ساخت های مورد نیاز  بانکداری الکترونیکی. 41

 

2-10-8 انواع کانال های ارائه خدمات الکترونیکی:. 44

 

2-10-9 سطوح بانکداری الکترونیک:. 48

 

2-10-11 امنیت در بانکداری الکترونیکی:. 49

 

2-11 معماری WAP:. 50

 

2-12 اجزای بانکداری الکترونیکی در ایران:. 51

 

2-12-1 انواع کارت ها. 51

 

2-12-2 شبکه شتاب:. 51

 

2-12-3سیستم تسویه بین بانکی مبادلات ارزی:. 51

 

2-12-4 شبکه سوئیچ عملیاتی خرد بانکی و بین بانکی:. 52

 

2-12-4-1 شبکه مرکزی سوئیفت. 52

 

2-13 شکل گیری شبکه شتاب از آغاز تا امروز:. 52

 

2-14سوئیفت (SWIFT). 53

 

2-14-1 تعریف سوئیفت. 53

 

2-14-2 مزایا و اهمیت سوئیفت (SWIFT). 53

 

2-14-3 کاربرد و کاربران سوئیفت. 55

 

2-14-4 ساز و کار عمل سوئیفت. 57

 

2-15 تجارب بین المللی برخی از کشورها در بانکداری الکترونیک  58

 

2-16 نقش مشتری در نظام بانکی:. 62

 

2-16-1 اهمیت مشتری:. 62

 

2-16-2 رضایت مشتری:. 63

 

2-17تشریح مفهوم وفاداری. 64

 

2-17-1 انواع وفاداری. 65

 

2-17-2مزایای وفاداری مشتریان. 66

 

2-17-3 عوامل مؤثر بر وفاداری:. 67

 

2-17-4 وفاداری یک فرد به یک بانک:. 69

 

2-18 تاریخچه بانک پارسیان. 69

 

2-18-1 اهداف بانک:. 69

 

2-18-2 سرمایه بانک:. 70

 

2-18-3 معاونین بانک:. 70

 

2-18-4 شرکت های وابسته به بانک:. 70

 

2-18-5 لوگو بانک پارسیان:. 71

 

2-18-6 مدیر عامل بانک :. 72

 

 

2-18-7 نمودار سازمانی بانک پارسیان. 73

 

2-19 چشم انداز آتی بانکداری الکترونیکی:. 73

 

تحقیقات داخلی:. 74

 

تحقیقات خارجی:. 76

 

فصل سوم: روش اجرای تحقیق. 78

 

3-1 مقدمه:. 79

 

3-2 روش تحقیق:. 79

 

3-3 جامعه آماری:. 80

 

3-4 روش نمونه گیری:. 80

 

3-5 روش ها و ابزار جمع آوری اطلاعات:. 80

 

3-6 روایی:. 81

 

3-7 پایایی:. 82

 

3-8 روش تجزیه و تحلیل اطلاعات:. 83

 

3-8-1 آمار توصیفی:. 84

 

فصل چهارم :تجزیه و تحلیل دادهها. 85

 

4-1- مقدمه. 86

 

4-2- آمار توصیفی. 86

 

4-2-1- توصیف متغیرهای جمعیت شناختی پاسخ دهندگان: توصیف جنسیت پاسخ دهندگان. 86

 

4-2-2 توصیف میزان تحصیلات. 87

 

4-2-3 توصیف سن. 88

 

4-2-4 در كدام سطح فعالیت شغلی دارید؟. 89

 

4-2-5 ارتباط بین جنسیت و وفاداری. 90

 

4-2-6 ارتباط بین تحصیلات و وفاداری. 91

 

4-2-7 توصیف متغیر کیفیت خدمات. 92

 

4-2-8  توصیف متغیر ارزش های دریافت شده. 93

 

4-2-9 توصیف متغیر اعتماد. 94

 

4-2-10 توصیف متغیر عادت. 95

 

4-2-11 توصیف متغیر اعتبار. 96

 

4-2-12 توصیف متغیر وفاداری مشتری. 97

 

4-3- بررسی نرمال بودن متغیرها. 98

 

4-4 آمار استنباطی. 99

 

فصل پنجم : نتیجه گیری و پیشنهادات. 105

 

5-1 مقدمه. 106

 

5-2 نتایج داده های آمار توصیفی:. 106

 

5-3 نتایج داده های آمار استنباطی:. 107

 

5-5 پیشنهادات براساس یافته های تحقیق:. 108

 

5-6 محدودیت های تحقیق:. 109

 

5-7 پیشنهادات برای تحقیقات آینده:. 109

 

منابع. 110

 

پیوست ها. 117

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست  جداول

 

عنوان                                                                                           صفحه

 

جدول 2-1) مقایسه بانکداری سنتی با بانکداری الکترونیکی. 39

 

جدول 3-1 )جدول مربوط به تعداد سوالات هر متغیر پرسشنامه. 81

 

جدول 3-2 )میزان آلفای کرنباخ پرسشنامه. 83

 

جدول 4- 1) توصیف متغیر جنسیت. 86

 

جدول4- 2) توصیف میزان تحصیلات. 87

 

جدول 4- 3) توصیف سن. 88

 

جدول4- 4) در كدام سطح فعالیت شغلی دارید؟. 89

 

جدول4_5)آماره توصیفی مربوط به گروه زن و مرد. 91

 

جدول4_6) تحلیل واریانس برای مقایسه ی وفاداری و سطح تحصیلات  91

 

جدول 4- 7) توصیف متغیر کیفیت خدمات. 92

 

جدول4- 8) توصیف متغیر ارزش های دریافت شده. 93

 

جدول 4- 9) توصیف متغیر اعتماد. 94

 

جدول 4- 10) توصیف متغیر عادت. 95

 

جدول 4- 11) توصیف متغیر اعتبار. 96

 

جدول 4-13) نتایج آزمون کولموگراف – اسمیرنوف. 98

 

جدول 4-14) ضریب همبستگی کیفیت خدمات الکترونیکی در وب سایت ها و وفاداری مشتریان. 99

 

جدول 4-15) ضریب همبستگی ارزش درک شده در وب سایت‌ها و وفاداری مشتریان. 100

 

جدول 4-16) ضریب همبستگی اعتماد در وب سایت ها و وفاداری مشتریان  101

 

جدول4 -17) ضریب همبستگی عادت در وب سایت‌ها و وفاداری مشتریان  102

 

جدول 4-18) ضریب همبستگی شهرت در وب سایت‌ها و وفاداری مشتریان  103

 

جدول 4-19) میزان آلفای کرونباخ پرسشنامه. 104

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                                                          صفحه

 

نمودار 1-1)مدل مفهومی. 7

 

نمودار 4- 1) نمودار دایره ای جنسیت. 87

 

نمودار 4-2) نمودار میله ای میزان تحصیلات. 88

 

نمودار  4-3) نمودار میله ای سن. 89

 

نمودار 4-4) در كدام سطح فعالیت شغلی دارید؟. 90

 

نمودار 4-7) نمودار هیستوگرام کیفیت خدمات. 92

 

نمودار 4-8) نمودار متغیر ارزش های دریافت شده. 93

 

نمودار  4-9) نمودار هیستوگرام اعتماد. 94

 

نمودار 4-10) نمودار هیستوگرام عادت. 95

 

نمودار 4-11) نمودار هیستوگرام اعتبار. 96

 

نمودار4-12) نمودار هیستوگرام مشتری. 97

 

 

 

 

 

 

 

1-4-4 ساختمان ومورفولوژی اسپرم موش صحرایی نر. 13

 

1-5 اسپرماتوژنز(spermatogenesis) 13

 

1-5-1 اسپرمیوژنز(Spermiogenesis) 15

 

1-6 Busulfan (Myleran) 15

 

1- 7 Wi-Fi 16

 

1-7-1 تابش یونیزاسیون غیر مستقیم. 17

 

1-7-2 دستگاه WI-FI 19

 

فصل دوم : روش کار

 

2-1 انتخاب حیوان. 22

 

2-1-1 گروه بندی حیوان. 23

 

2-1-2 وزن کردن حیوان. 24

 

2-2 عصاره سنجد. 24

 

2-2-1دستگاه های مورد استفاده جهت عصاره گیری.. 24

 

2-2-2 روش تهیه عصاره هیدرو الکلی سنجد. 27

 

2-2-3 روش دادن عصاره 27

 

2-2-4 مبنای انتخاب دوز عصاره 28

 

2-3 روش آماده کردن داروی بوسولفان. 28

 

2-3-1 دوز داروی مورد استفاده 28

 

2-3-2 روش دادن دارو. 29

 

2-4 روش دادن تابش اشعه Wi-Fi 29

 

2-4-1 دستگاه های استفاده شده جهت دادن تابش… 29

 

2-4-2 طرز چیدمان موش ها جهت دریافت اشعه Wi-Fi 30

 

2-6 روش جمع آوری اسپرم و خون گیری.. 32

 

2-6-1 روش تهیه اسمیر. 34

 

2-6-2 طرز تهیه محلول HBSS.. 34

 

2-6-3 روش استخراج سرم. 34

 

2-8 پاساژ (Passage) یا گردش بافتی ( Processing) 35

 

2-9  شمارش اسپرم. 36

 

2-10  روش رنگ آمیزی اسمیر های تهیه شده از اسپرم. 36

 

2-11 مواد و وسایل.. 37

 

فصل سوم : یافته­های پژوهش

 

3-1- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر تعداد اسپرم­ها 41

 

3-2- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های پیشرونده سریع (GI) 43

 

3-3- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های با حرکت درجا (GII) 46

 

3-4- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های پیشرونده با حرکت آهسته (GIII) 48

 

3-5- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های بدون حرکت (GIV) 51

 

3-6- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر وزن بیضه موش­ها 54

 

3-7- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر میزان هورمون تستوسترون. 56

 

3-8- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر امواج WiFi و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر تعداد اسپرم­ها 58

 

3-9- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر امواج WiFi و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های پیشرونده سریع (GI) 60

 

3-10- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر امواج WiFi و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های با حرکت درجا (GII) 62

 

3-11- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر امواج WiFi و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های پیشرونده با حرکت آهسته (GIII) 64

 

3-12- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر امواج WiFi و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر درصد اسپرم­های بدون حرکت (GIV) 66

 

3-13- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر امواج WiFi و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر وزن بیضه موش­ها 67

 

3-14- یافته­های مربوط به بررسی تأثیر امواج WiFi و اثر حفاظتی عصاره­ی هیدروالکلی سنجد بر میزان هورمون تستوسترون  69

 

3-15 یافته های مربوط به بررسی تاثیر امواج Wi-Fi، داروی بوسولفان و اثر حفاظتی عصاره هیدرو الکلی سنجد بر بافت بیضه. 70

 

فصل چهارم : بحث و نتیجه گیری

 

4-1 عصاره سنجد. 75

 

4-2  داروی بوسولفان. 76

 

4-2-1 تاثیر داروی بوسولفان بر تعداد، تحرک اسپرم ها و وزن بیضه موش و اثر حفاظتی عصاره سنجد بعد از تزریق داروی بوسولفان. 76

 

4-2-2 تاثیر بوسولفان  بر هورمون تستوسترون  و اثر حفاظتی عصاره سنجد. 77

 

4-2-3 تاثیر بوسولفان بر بافت بیضه و اثر حفاظتی عصاره سنجد. 78

 

4-3  Wi-Fi 81

 

 

4-3-1  تاثیر اشعه Wi-Fi بر تعداد و تحرک اسپرم و وزن بیضه در موش و اثر حفاظتی عصاره سنجد در برابر تابش Wi-Fi 81

 

4-3-2  تاثیر امواج Wi-Fi بر هورمون تستوسترون و اثر حفاظتی عصاره سنجد بر آن  83

 

4-3-3  تاثیر امواج  Wi-Fi  بر بافت بیضه موش و اثر حفاظتی عصاره سنجد بر آن  83

 

پیشنهادها 85

 

فهرست منابع و مأخذ

 

منابع فارسی.. 87

 

منابع انگلیسی.. 88

 

Abstract 100

 

فهرست جدول­ها

 

جدول 2-1: لیست وسایل مصرفی.. 37

 

جدول 2-2: لیست مواد مصرفی.. 38

 

جدول 2-3: لیست ابزارها و دستگاه های مورد استفاده 39

 

جـدول 3-1: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) تعداد اسپرم­ها (میلیون بر میلیلیتر) در گروه­های مختلف   42

 

جـدول 3-2: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرم­های پیشرونده سریع در گروه­های مختلف   44

 

جـدول 3-3: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرمهای با حرکت درجا در گروه­های مختلف   47

 

جـدول 3-4: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرم­های پیشرونده با حرکت آهسته در گروه­های مختلف   49

 

جـدول 3-5: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرم­های بدون حرکت در گروه­های مختلف   52

 

جـدول 3-6: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) وزن بیضه موش­ها در گروه­های مختلف… 55

 

جـدول 3-7: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) هورمون تستوسترون در گروه­های مختلف… 57

 

جـدول 3-8: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) تعداد اسپرمها (میلیون بر میلیلیتر) در گروه­های مختلف   58

 

جـدول 3-9: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرم­های پیشرونده سریع در گروه­های مختلف   60

 

جـدول 3-10: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرمهای با حرکت درجا در گروه­های مختلف   62

 

جـدول 3-11: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرم­های پیشرونده با حرکت آهسته در گروه­های مختلف   64

 

جـدول 3-12: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرمهای بدون حرکت در گروههای مختلف   66

 

جـدول 3-13: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) وزن بیضه موشها در گروههای مختلف… 68

 

جـدول 3-14: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) هورمون تستوسترون در گروههای مختلف… 69

 

جدول 3-15: 71

 

فهرست نمودارها

 

نمودار 3-1: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) تعداد اسپرم­ها در گروه­های مختلف… 43

 

نمودار 3-3: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرم­های با حرکت درجا در گروه­های مختلف   48

 

نمودار 3-4: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرم­های پیشرونده با حرکت آهسته در گروه­های مختلف   50

 

نمودار 3-5: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) درصد اسپرمهای بدون حرکت در گروههای مختلف   53

 

نمودار 3-6: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) وزن بیضه موش­ها در گروه­های مختلف… 56

 

نمودار 3-7: نمودار باکس- ویسکر (box-and-whisker plots) برای هورمون تستوسترون در گروه­های مختلف   57

 

نمودار 3-8: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) تعداد اسپرم­ها در گروه­های مختلف… 59

 

نمودار 3-9: نمودار باکس- ویسکر (box-and-whisker plots) برای درصد اسپرم­های پیشرونده سریع در گروه­های مختلف… 61

 

نمودار 3-10: نمودار باکس- ویسکر (box-and-whisker plots) برای درصد اسپرم­های با حرکت درجا در گروه­های مختلف… 63

 

نمودار 3-11: نمودار باکس- ویسکر (box-and-whisker plots) برای درصد اسپرم­های پیشرونده با حرکت آهسته در گروه­های مختلف… 65

 

نمودار 3-12: نمودار باکس- ویسکر (box-and-whisker plots) برای درصد اسپرم­های بدون حرکت در گروه­های مختلف… 67

 

نمودار 3-13: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) وزن بیضه موش­ها در گروه­های مختلف… 68

 

نمودار 3-14: میانگین و خطای معیار میانگین ( ) هورمون تستوسترون در گروه­های مختلف… 70

 

 

 

فهرست شکل­ها

 

شکل 1-1: درخت سنجد. 7

 

شکل 2-1: نمایی از اتاق حیوانات دانشکده علوم پزشکی شیراز. 22

 

شکل 2-2: دستگاه دسیکاتور. 24

 

شکل 2-3: دستگاه روتاری.. 25

 

شکل 2-4: دستگاه پرکولاتور. 26

 

شکل 2-5: طرز چیدمان موش ها داخل مقید کننده در اطراف مودم Wi-Fi 31

 

شکل 2-6: تشریح موش صحرایی.. 33

 

شکل 4-1: تصاویر میکروسکوپی مطالعات بافت شناسی گروه های آزمایشی 1 تا 9. 72

 

شکل 4-2: تصاویر میکروسکوپی اسمیرهای اسپرم با رنگ آمیزی ائوزین گروه های آزمایشی 1 تا 9. 73

 

 

 

چکیده

 

در این مطالعه تاثیرات داروی بوسولفان و امواج Wi-Fi را بر روند اسپرماتوژنز، بافت بیضه و هورمون تستسترون موش سفید بزرگ آزمایشگاهی نر از نژاد اسپراگوداولی مورد بررسی قرار گرفت و همچنین از عصاره هیدروالکلی میوه سنجد به عنوان یک داروی محافظت کننده در برابر اثرات بوسولفان و امواج Wi-Fi استفاده شد و به صورت مقایسه ای این مطالعه صورت گرفت.برای انجام این تحقیق 100سر موش سفید بزگ آزمایشگاهی نر با وزن 200-250 گرم انتخاب و در شرایط نوری و غذایی مناسب مورد آزمایش قرار گرفتند. موش ها بر حسب متغیر های تزریق بوسولفان، تابش امواج Wi-Fi و دریافت عصاره سنجد به صورت گاواژ، به طور تصادفی  به 10 گروه 10 تایی تقسیم شدند.

 

گروه 1 به عنوان گروه کنترل حقیقی(هیچ دارو و اشعه ای دریافت نکردند)، گروه 2 به عنوان گروه شم (2ml/kg آب مقطر به صورت گاواژ به مدت 48 روز دریافت کردند)، گروه 3 به عنوان گروه تجربی 1 (2ml/kg  عصاره هیدرو الکلی سنجد به صورت گاواژ به مدت 48 روز دریافت کردند)، گروه4 به عنوان گروه تجربی 2(یک دوز 5ml/kg  بوسولفان به صورت)Intraperitoneal (Ip)داخل صفاقی) دریافت کردند و سپس به مدت 48 روز آب و غذای روزانه دریافت کردند)، گروه5 به عنوان گروه تجربی 3 (یک دوز5mg/kg بوسولفان به صورت (Ip)داخل صفاقی دریافت کردند و سپس به مدت 48 روز 2ml/kg عصاره سنجد، به صورت گاواژ دریافت کردند) گروه 6 به عنوان گروه تجربی 4 (یک دوز 15mg/kg بوسولفان به  صورت Ip دریافت کردند و سپس به مدت 48 روز آب و غذای روزانه دریافت کردند )، گروه 7 به عنوان گروه تجربی 5(یک دوز 15mg/kg بوسولفان به صورت Ip دریافت کردند سپس به مدت 48 روز عصاره هیدرو الکلی سنجد2ml/kg)) به صورت گاواژ در یافت کردند)، گروه 8 به عنوان گروه تجربی 6( موش ها در داخل مقیدکننده(Restrainer) قرار داده و روزانه  4ساعت به مدت 48 روز در معرض تابش اشعه Wi-Fi قرار گرفتند). گروه 9 به عنوان گروه تجربی 7 ( موش ها میزان 2ml/kg عصاره هیدرو الکلی سنجد به صورت گاواژ دریافت نموده سپس موش ها داخل مقیدکننده(Restrainer) قرار داده شدند و روزانه 4ساعت به مدت 48 روز در معرض تابش اشعه  Wi-Fi قرار داده شدند)، گروه 10 به عنوان گروه کنترل Wi-Fi (موش ها روزانه به مدت 4 ساعت داخل مقیدکننده(Restrainer) به مدت 48 روز بدون دریافت هیچ تابشی قرار داده شدند.)

 

1-6-2-1 مراحل آپوپتوز ……………………………………………………………………………………………………………………….19

 

1-6-2-2 مسیر های آپوپتوز………………………………………………………………………………………………………………….21

 

1-6-2-3- عناصر کلیدی مسیرهای آپوپتوز………………………………………………………………………………………….21

 

1-6-2-4- روش های بررسی آپوپتوز …………………………………………………………………………………………………..23

 

1-6-2-4-1-  بررسی تغییرات غشاء پلاسمایی در مرگ سول ……………………………………………………………23

 

1-6-2-4-1-1- تعیین فسفاتیدیل سرین سطح بیرونی غشاء سلول……………………………………………………24

 

1-6-2-4-2-  بررسی سیتوتوکسیسیتی ………………………………………………………………………………………………24

 

1-6-2-4-3-  بررسی تغییرات مورفولوژی …………………………………………………………………………………………..25

 

1-6-2-4-3-1-  استفاده از میکروسکوپ الکترونی………………………………………………………………………………25

 

1-6-2-4-3-2-  استفاده از میکروسکوپ نوری وفلورسانس………………………………………………………………..25

 

1-7-  منشاء آسیب DNA اسپرم…………………………………………………………………………………………………………26

 

1-7-1-  بسته بندی غیرطبیعی كروماتین……………………………………………………………………………………………27

 

1-8-  ساختار کروماتین اسپرم و تأثیر آن بر ناباروری …………………………………………………………………………28

 

1-8-1-  بررسی ساختار کروماتین اسپرم……………………………………………………………………………………………..28

 

1-9-  نقش آپوپتوز در آسیب DNA اسپرم………………………………………………………………………………………..29

 

1-10-  استرس اكسیداتیو به واسطه ROS…………………………………………………………………………………………30

 

1-11-  تاثیر عوامل محیطی برسلامت DNA  و میزان موفقیت روشهای کمک باروری…………………..31

 

1-11-1-  مصرف سیگار………………………………………………………………………………………………………………………..31

 

1-11-2-  مواجهات شغلی…………………………………………………………………………………………………………………….32

 

1-11-3-  داروهای شیمی درمانی و رادیوتراپی……………………………………………………………………………………33

 

1-11-4-  سن………………………………………………………………………………………………………………………………………..33

 

1-12-  تكنیك­های بررسی ساختار كروماتین……………………………………………………………………………………….33

 

1-12-1-  روش­های تعیین آسیب DNA اسپرم انسان………………………………………………………………………34

 

1-12-1-1- تست TUNEL……………………………………………………………………………………………………………….35

 

1-12-1-2- روش DBD-FISH………………………………………………………………………………………………………..35

 

1-12-1-3- روش Comet…………………………………………………………………………………………………………………..36

 

1-12-1-4- رنگ­آمیزی CMA3…………………………………………………………………………………………………………36

 

1-12-1-5- تكنیك SCSA………………………………………………………………………………………………………………..37

 

1-12-1-6- تست  SCD……………………………………………………………………………………………………………………..37

 

1-12-1-7- رنگ­آمیزی آكریدین اورانژ………………………………………………………………………………………………..39

 

1-12-1-8- رنگ­­آمیزی تولوئیدین بلو………………………………………………………………………………………………….39

 

1-13- روش مهاجرت اسپرم………………………………………………………………………………………………………………….39

 

1-14- روش سانتریفیوژ شیب غلظت…………………………………………………………………………………………………….40

 

فصل دوم- مواد و روش ها………………………………………………………………………………………………………………………41

 

2-1- مواد و وسایل  مورد نیاز…………………………………………………………………………………………………………………42

 

2-1-1- وسایل مورد نیاز………………………………………………………………………………………………………………………….42

 

2-1-2- مواد مورد نیاز……………………………………………………………………………………………………………………………..42

 

2-2- ساخت محلول های مورد نیاز…………………………………………………………………………………………………………45

 

2-2-1- ساخت محلول Ham’s F10…………………………………………………………………………………………………….45

 

2-2-2- محلول های لازم برای تست پراکندگی کروماتین اسپرم (SCD)…………………………………………..46

 

2-2-3- ساخت محلول تانل……………………………………………………………………………………………………………………..46

 

2-2-4- ساخت محلول (PBS)……………………………………………………………………………………………………………….46

 

2-2-5- ساخت رنگ ائوزین-نیگروزین…………………………………………………………………………………………………….47

 

2-2-6- ساخت رنگ رایت………………………………………………………………………………………………………………………..47

 

2-3- روشها………………………………………………………………………………………………………………………………………………..48

 

2-3-1- روش جمع آوری اسپرم…………………………………………………………………………………………………………….. 48

 

2-3-2- آنالیز مایع انزالی………………………………………………………………………………………………………………………… 48

 

2-3-2-1- آزمایشات ماکروسکوپی…………………………………………………………………………………………………………..48

 

2-3-2-1-1-  ظاهر………………………………………………………………………………………………………………………………….48

 

2-3-2-1-2- آبکی کردن…………………………………………………………………………………………………………………………48

 

2-3-2-1-3-  حجم………………………………………………………………………………………………………………………………….48

 

2-3-2-1-4-  چسبندگی…………………………………………………………………………………………………………………………48

 

2-3-2-2- آزمایشات میکروسکوپی………………………………………………………………………………………………………….49

 

 

2-3-2-2-1- آگلوتیناسیون……………………………………………………………………………………………………………………..50

 

2-3-2-2-2- بررسی تعداد اسپرم…………………………………………………………………………………………………………..50

 

2-3-2-2-2-1- روش استفاده از MAKLER CHAMBER برای شمارش ………………………………………..50

 

2-3-2-2-3- ارزیابی تحرک……………………………………………………………………………………………………………………51

 

2-3-2-2-3-1- روش کار……………………………………………………………………………………………………………………….52

 

2-3-2-2-4- ارزیابی قابلیت حیات…………………………………………………………………………………………………………53

 

2-3-2-2-4-1- روش کار رنگ آمیزی ائوزین-نیگروزین………………………………………………………………………53

 

2-3-2-2-5- ارزیابی مورفولوژی………………………………………………………………………………………………………………54

 

2-3-2-2-5-1- رنگ آمیزی پاپانیکولا……………………………………………………………………………………………………54

 

2-3-2-2-5-2- روش فیکس کردن………………………………………………………………………………………………………..54

 

2-3-2-2-5-3-روش رنگ آمیزی پاپانیکولا……………………………………………………………………………………………55

 

2-3-3-  Direct swim-up………………………………………………………………………………………………………………………57

 

2-3-3-1- روش کار………………………………………………………………………………………………………………………………….57

 

2-3-4- تست بررسی میزان پراکندگی کروماتین اسپرم (SCD)……………………………………………………………58

 

2-3-4-1- روش کار…………………………………………………………………………………………………………………………………58

 

2-3-5- روش رنگ آمیزی تانل…………………………………………………………………………………………………………………60

 

2-3-6- آنالیز آماری………………………………………………………………………………………………………………………………….62

 

فصل سوم- نتایج………………………………………………………………………………………………………………………………………..63

 

3-1 نتایج اثر آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی تحرک اسپرم………………………………64

 

3-2- نتایج اثر آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی قابلیت حیات اسپرم………………….67

 

3-3- نتایج اثر آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی مورفولوژی اسپرم……………………..68

 

3-4- نتایج اثر آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی قطعه قطعه شدن DNA اسپرم………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….70

 

3-5- نتایج اثر زمان های مختلف انکوباسیون(3،2،1،0ساعت) بعد از  آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی قطعه قطعه شدن DNA اسپرم………………………………………………………………………………….72

 

3-6- نتایج اثر زمان های مختلف انکوباسیون(3،2،1،0ساعت) بعد از  آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی آپوپتوز اسپرم………………………………………………………………………………………………………………75

 

3-7- رابطه میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم با سایر پارامترهای اسپرم……………………………………78

 

3-8- رابطه میزان آپوپتوز اسپرم با سایر پارامترهای اسپرم…………………………………………………………………..79

 

3-9- رابطه میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم با میزان آپوپتوز اسپرم…………………………………………..80

 

3-10- نتایج کلی……………………………………………………………………………………………………………………………………80

 

فصل چهارم- بحث………………………………………………………………………………………………………………………………….81

 

4-1- تا ثیر روش آماده سازی Dricct Swim up بر روی پارامترهای اسپرم………………………………………83

 

4-2- تاثیر زمان های مختلف انکوباسیون اسپرم در دمای 37 درجه سانتی گراد بر روی قطعه قطعه شدن DNA و آپوپتوز اسپرم…………………………………………………………………………………………………………………..84

 

4-3- پیشنهادات…………………………………………………………………………………………………………………………………….90

 

منابع

 

چکیده انگلیسی

 

فهرست شکل ها

 

 1-1- ساختار اسپرم انسانی……………………………………………………………………………………………………………………..9

 

1-2- ارزیابی آسیب DNA توسط: …………..…………….…A.TUNEL, B.COMET, C.CMA337

 

1-3- تست  SCD………………………………………………………………………………………………………………………………….38

 

2-1- انواع مختلف آگلوتیناسیون…………………………………………………………………………………………………………..50

 

2-2- MAKLER CHAMBERبرای شمارش اسپرم استفاده می شود………………………………………………51

 

2 -3- شکل لامل MAKLER CHAMBER …………………………………………………………………………………….52

 

2-4- چگونگی قرارگیری لوله فالکون بازاویه 45 درجه در انکوباتور…………………………………………………….57

 

3-1- رنگ آمیزی ائوزین-نیگروزین برای سنجش میزان زنده یا مرده بودن اسپرم…………………………….67

 

3-2- رنگ آمیزی پاپانیکولا ………………………………………………………………………………………………………………….69

 

3-3- تست SCD برای بررسی میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم میباشد……………………………………74

 

 3-4- رنگ آمیزی TUNEL………………………………………………………………………………………………………………….76

 

 

 

فهرست جدول ها

 

1-1 : خصوصیات میکرسکوپی نمونه انزال طبیعی مطابق با استاندارد های سازمان بهداشت جهانی (2010/WHO)…………………………………………………………………………………………………………………………………….17

 

2-1- ساخت Ham’sf10……………………………………………………………………………………………………………………..45

 

2-2- محلول های لازم برای رنگ آمیزی پاپانیکولا………………………………………………………………………………55

 

3-1-مقایسه پارامترهای اسپرمی قبل و بعد از آماده سازی اسپرم ……………………………………………………..71

 

3-2-مقایسه میانگین اثر زمان های مختلف انکوباسیون(3،2،1،0ساعت) بعد از  آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی قطعه قطعه شدن DNA آپوپتوز اسپرم………………77

 

3-3-مقایسه مقدار P اثر زمان های مختلف انکوباسیون(3،2،1،0ساعت) بعد از  آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up  برروی قطعه قطعه شدن DNA و آپوپتوز اسپرم…………………………………..77

 

3-4- رابطه میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم با سایر پارامترهای اسپرم……………………………………78

 

3-5- رابطه میزان آپوپتوز اسپرم با سایر پارامترهای اسپرم………………………………………………………………….79

 

فهرست نمودارها

 

3-1- مقایسه میانگین حرکت پیشرونده، حرکت سریع و حرکت کند قبل و بعد از آماده سازی اسپرم به روش Swim-up……………………………………………………………………………………………………………………………….66

 

3-2- مقایسه میانگین قابلیت حیات و مورفولوژی اسپرم قبل و بعد از آماده سازی به روش  Swim-up…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..68

 

3-3- مقایسه میانگین حرکت پیشرونده و قطعه قطعه شدن DNA اسپرم قبل و بعد از آماده سازی به روش   Swim-up………………………………………………………………………………………………………………………………..70

 

3-4- مقایسه میانگین قطعه قطعه شدن DNA  اسپرم در زمان های مختلف انکوباسیون بعد از آماده سازی به روش  Swim-up…………………………………………………………………………………………………………………..73

 

3-5- مقایسه میانگین آپوپتوز  اسپرم در زمان های مختلف انکوباسیون بعد از آماده سازی به روش  Swim-up……………………………………………………………………………………………………………………………………………76

 

 

 

چکیده

 

یکی از علت های شکست و عدم موفقیت در تکنیک های کمک باروری(ART) قطعه قطعه شدن DNA اسپرم انسانی است، که ممکن است با انکوباسیون طولانی مدت اسپرم در دمای 37 درجه سانتی گراد به وجود آید. لذا در این مطالعه میزان قطعه قطعه شدن و آپوپتوز DNA اسپرم انسانی بعد از آماده سازی به روش Direct swim-up در زمان های مختلف انکوباسیون به وسیله تست SCD و تکنیک TUNEL مورد ارزیابی قرار گرفت.

 

در این مطالعه آینده نگر، بیست ویک نمونه ی اسپرم نرمال مورد مطالعه قرار گرفت. برای بررسی مورفولوژی اسپرم از رنگ آمیزی  Papanicolaou و قابلیت حیات اسپرم از رنگ آمیزی Eosin-Nigrosin  استفاده شد. نمونه ها در دمای 37 درجه سانتی گراد بعد از آماده سازی به روش Direct swim-up در زمان های مختلف انکوبه شدند. قطعه قطعه شدن DNA در فواصل زمانی مختلف (3،2،1،0 ساعت) با استفاده از تست SCD مورد بررسی قرار گرفت. اسپرم های دارای هاله بزرگ و متوسط، DNA سالم داشتند و اسپرم هایی که دارای هاله کوچک و بدون هاله بودند DNA قطعه قطعه شده داشتند. میزان آپوپتوز نیز به وسیله تکنیک TUNEL مورد ارزیابی قرار گرفت.

 

میانگین مورفولوژی نرمال و حرکت پیشرونده اسپرم بعد از آماده سازی به روش Direct swim-up  53/2±33/72 و 02/1±10/90 بوده است. میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم به میزان معنی داری افزایش یافت بعد از دو ساعت (935/0±81/8، 004/0 P=) و بعد از سه ساعت (894/0±76/10، 0001/0 P=) انکوباسیون نسبت به زمان صفر (809/0±38/4) بوده است. همچنین میزان آپوپتوز DNA اسپرم در زمان دو ساعت انکوباسیون نسبت به زمان صفر  (864/0±19/9، 008/0 P=) و نیز زمان سه ساعت نسبت به زمان یک ساعت ( 7/0±97/10، 002/0 P=) انکوباسیون معنی دار شده است.

 

1-8- قلمرو تحقیق.. 6

 

1-9- تعریف واژه­ها و اصطلاحات… 6

 

1-10- نوع و روش تحقیق.. 6

 

1-11- محدودیت­های تحقیق.. 7

 

1-12- جمع بندی.. 8

 

فصل دوم: مبانی نظری و پیشینه تحقیق. 9

 

2-1- مبانی نظری تحقیق.. 10

 

2-1-1- مقدمه. 10

 

2-1-2-عوامل مؤثر بر تعیین سیاست توزیع سود سهام. 10

 

2-1-3- روشهای تقسیم سود. 12

 

2-1-3-1 پرداخت سود نقدی.. 13

 

2-1-3-1-1- تقسیم مبلغ ثابت و معینی بین سهامداران.. 13

 

2-1- 3-1-2-تقسیم درصدی از سود ثابت… 13

 

2-1-3-1-3- سیاست تقسیم سود ثابت به علاوه حاشیه متغیر.. 14

 

2-1-3-1-4- سیاست تقسیم سود مازاد. 14

 

2-1-3-2- سهام جایزه. 15

 

2-1-3-3- تجزیه سهام. 15

 

2-1-4- چرا شرکتها سود تقسیم می­نمایند. 16

 

2-1-5-سیاست تقسیم سود در جهان واقعی.. 17

 

2-1-5-1- سیاست تقسیم سود در آمریکا 17

 

2-1-5-2- پرداخت سود تقسیمی در خارج از آمریکا 18

 

2-1-6-مقررات قانونی در خصوص تقسیم سود. 19

 

2-1-7- دیدگاه­های مختلف دربارۀ سیاست پرداخت سود سهام. 21

 

2-1-7-1- نظریۀ سنتی.. 22

 

2-1-7-2- مدل والتر.. 24

 

2-1-7- 3-مدل گوردون.. 25

 

2-1-7-3-1- مدل تجدید نظر شده گوردون.. 27

 

2-1-7-4- قضیه مودیلیانی و میلر.. 27

 

2-1-7-5- قضیه رادیکال.. 28

 

2-1-7-6- توسعه های تئوریک اخیر.. 29

 

2-1-8- نکات عمده در سیاست تقسیم سود. 30

 

2-1-8-1- عدم تقارن اطلاعاتی.. 30

 

2-1-8-2- مشکلات نمایندگی.. 31

 

2-1-8-3- محدودیت های نهادی.. 31

 

2-1-8-4- انتقال دارائی.. 32

 

2-1-8-5- هزینه های معاملاتی.. 32

 

2-1-8-6- موضوعات رفتاری.. 32

 

2-1-8-7- ملاحظات مالیاتی  و بازخرید سهام. 33

 

2-1-8-9- دلیل این مطالعه. 34

 

2-2- پیشینه تحقیق.. 35

 

2-2-1- عدم تقارن اطلاعاتی و علامت دهی.. 35

 

2-2-2- هزینۀ نمایندگی.. 41

 

2-2-2-1- الگوی اساسی نمایندگی.. 42

 

2-2- 3-مدل­های مشتری سود تقسیمی.. 46

 

2-2-4- توضیحات مالی رفتاری برای تقسیم سود. 49

 

2-2-5- پژوهشهای انجام شده در ایران.. 51

 

2-2-6-مبانی تدوین فرضیه­ها 53

 

2-2-6-1- محتوای اطلاعاتی.. 53

 

2-2-6-2- سطح جریانات نقد آزاد. 54

 

2-2-6-3- مالکیت نهادی.. 55

 

2-2-6-4- سطح بدهی.. 56

 

2-2-6-5- نسبت q توبین شرکت… 57

 

2-2-6-6 نقدشوندگی بازار سهام شرکت… 57

 

 

2-2-6-7- واکنش بازار در طی زمان.. 58

 

فصل سوم : کلیات و طرح تحقیق 60

 

3-1-روش تحقیق.. 61

 

3-2- جامعه آماری و نمونه آماری.. 62

 

3-3- متغیرهای تحقیق.. 65

 

3-3-1- واکنش بازار.. 65

 

3-3-1-1- بازده غیر عادی.. 65

 

3-3-1-1-1-مدل تعدیل شده بازار.. 65

 

3-3-1-1-2-مدل بازار.. 65

 

3-3-1-1-3-مدل CAPM… 66

 

3-3-1-1-4- مدل فاما و فرنچ.. 66

 

3-3-1-2- استفاده از مدل تعدیل شده بازار.. 66

 

3-3-1-3- دلایل استفاده از مدل تعدیل شده بازار.. 67

 

3-3-1-4- بازده غیر عادی.. 68

 

3-3-1-5- بازده غیر عادی انباشته. 69

 

3-3-2- درصد تغییر در سود نقدی.. 69

 

3-3-3- جریان نقد آزاد. 69

 

3-3-4- نسبت بدهی به حقوق صاحبان سهام. 71

 

3-3-5- نقدشوندگی.. 72

 

3-3-6- مالکیت نهادی.. 72

 

3-3-7- فرصت رشد. 73

 

3-4- ابزارها و روش­های جمع­آوری داده­ها 74

 

3-5- روش تجزیه و تحلیل داده ها و اطلاعات… 74

 

3-5- 1-رگرسیون خطی.. 74

 

3-5- 1-1-آزمون دوربین – واتسون.. 75

 

3-5- 1-2-بررسی نرمال بودن خطاها 75

 

3-5- 1-3- آزمون هم خطی.. 76

 

3-5- 1-4- راه حل های رفع هم خطی.. 76

 

3-5- 2- تخمین از  طریق روش داده­های تلفیقی.. 77

 

3-5- 2-1- مزایای استفاده از داده‌های تابلویی.. 78

 

3-5- 2-2- داده های تلفیقی متوازن و غیر متوازن.. 79

 

3-5- 2-3- مدل كلی داده‌های تابلویی.. 79

 

3-5- 2-3- تخمین زن های اثرات ثابت و تصادفی.. 81

 

3-5- 2-5- تشخیص استفاده از روش­ اثرات ثابت یا اثرات تصادفی.. 85

 

3-5- 2-5-1- آزمون F (آزمون برابری عرض از مبداء ها). 85

 

3-5- 2-5-2- آزمون هاسمن: انتخاب بین اثرات ثابت یا تصادفی.. 87

 

3-6- جمع بندی.. 88

 

. 90

 

4-2- آمار توصیفی.. 90

 

4-2-1- متغیر­های مورد استفاده. 90

 

4-2-2- فراوانی شرکت­های مورد بررسی.. 91

 

4-2-3- آمار توصیفی هر یک از متغیرها 91

 

4-3-بررسی مفروضات رگرسیون.. 92

 

4-3-1-آزمون هم­خطی.. 92

 

4-3-2-آزمون استقلال خطاها 93

 

4-3-3-بررسی نرمال بودن توزیع  پسماندها.. 93

 

 4-4- آزمون فرضیات… 94

 

4-5- نتایج آزمون فرضیات… 95

 

4-5-1- آزمون فرضیه اول.. 95

 

4-5-2- آزمون فرضیه 2.. 96

 

4-5- 3-آزمون فرضیه 3 و 4.. 97

 

4-5-4- آزمون فرضیه 5 و 6.. 97

 

4-5-5- آزمون فرضیه 7 و 8.. 98

 

4-5-6- آزمون فرضیات 9 و 10.. 99

 

4-5-7- آزمون فرضیات 11 و 12.. 100

 

4-5-8- آزمون فرضیات 13 و 14.. 101

 

4-6-جمع­بندی.. 101

 

. 103

 

5-1- مقدمه. 104

 

5-2- نتایج حاصل از بررسی سؤال­ها و فرضیه­های پژوهشی.. 104

 

5-2- 1-نتایج حاصل از فرضیات اول و دوم و مقایسه نتایج با سایر تحقیقات انجام شده. 105

 

5-2-2- نتایج حاصل از فرضیات سوم و چهارم و مقایسه نتایج با سایر تحقیقات انجام شده. 106

 

5-2-3- نتایج حاصل از فرضیات پنجم و ششم و مقایسه نتایج با سایر تحقیقات انجام شده. 106

 

5-2-4- نتایج حاصل از فرضیات هفتم و هشتم مقایسه نتایج با سایر تحقیقات انجام شده. 107

 

5-2-5- نتایج حاصل از فرضیات نهم و دهم و مقایسه نتایج با سایر تحقیقات انجام شده. 107

 

5-2-6- نتایج حاصل از فرضیات یازدهم و دوازدهم و مقایسه نتایج با سایر تحقیقات انجام شده. 107

 

5-2-7-نتایج حاصل از فرضیات سیزدهم وچهاردهم و مقایسه نتایج باسایر تحقیقات انجام شده. 108

 

5-3-پیشنهادات کاربردی.. 108

 

5-4- پیشنهادات برای تحقیقات آینده. 108

 

پیوست­ها. 110

 

. 118

 

 

 

 

 

 

 

فهرست شکل­ها

 

عنوان                                                                                                         صفحه

 

شکل2 -1- فرآیند پرداخت سود سهام. 20

 

شکل 2-2- مکاتب فکری در تقسیم سود. 22

 

شکل 2-3- روابط نمایندگی. 42

 

شکل 3-1- نمایش مراحل کلی انجام پژوهش. 64

 

 

 

 

 

 

 

 فهرست جدول­ها

 

عنوان                                                                                                         صفحه

 

جدول 4-1- تعریف متغیر­های تحقیق. 90

 

جدول4-2- فراوانی شرکت­های مورد بررسی در هر یک از فرضیات  91

 

جدول 4-3- آمار توصیفی هر یک از متغیرها. 91

 

جدول 4-4- بررسی استقلال متغیرهای تحقیق. 92

 

جدول 4-5- آزمون استقلال خطاها. 93

 

جدول 4-6- ارزش زمان. 95

 

جدول 4-7- خلاصه نتایج حاصل از آزمون فرضیه 1. 95

 

جدول 4-8- خلاصه نتایج حاصل از آزمون فرضیه 2. 96

 

جدول 4-9- خلاصه نتایج حاصل از آزمون فرضیه­های 3 و 4. 97

 

جدول 4-10- خلاصه نتایج حاصل از آزمون فرضیه­های 5 و 6. 98

 

جدول 4-11- خلاصه نتایج حاصل از آزمون فرضیه­های 7 و 8. 98

 

1-5-1 عوارض جانبی تتراسایکلین‌ها 11

 

1-5-2 عوارض جانبی کلرامفنیکل.. 13

 

1-5-3 عوارض جانبی پنی‌سیلین.. 15

 

فصل 2 مروری بر تحقیقات انجام شده 17

 

فصل 3 مواد و روش‌های استفاده شده 21

 

3-1 مواد. 21

 

3-1-1 مواد و محلول‌ها مصرفی.. 21

 

3-1-2 کیت‌های مصرفی.. 22

 

3-1-3 تجهیزات مورد استفاده 25

 

3-2 روش اریمونواسی.. 26

 

3-2-1 بررسی باقیمانده تتراسایکلین‌ها با روش ایمونواسی.. 26

 

3-2-2 بررسی باقیمانده کلرامفنیکل با روش ایمونواسی.. 29

 

3-2-3 بررسی باقیمانده پنی‌سیلین.. 31

 

3-3 روش کوروماتوگرافی مایع.. 32

 

3-3-1 فاز متحرك… 33

 

3-3-2 پمپ… 34

 

3-3-3 انژكتور (محل تزریق). 35

 

3-3-4 ستون. 36

 

3-3-5 بررسی باقیمانده آنتی‌بیوتیک‌ها با روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا. 40

 

3-4 جداسازی باکتری‌های سالمونلا، اشرشیاکلی و استافیلوکوک اورئوس… 42

 

3-4-1 آماده‌سازی نمونه گوشت قرمز و سفید. 42

 

3-4-2 شمارش استافیلوکوک‌های کواگولاز مثبت در نمونه گوشت سفید وقرمز. 42

 

3-4-3 جداسازی سالمونلا در نمونه گوشت سفید و قرمز. 43

 

فصل 4 نتایج به دست آمده و بحث… 52

 

4-1 نتایج.. 52

 

4-1-1 نتایج به دست آمده با روش کروماتوگرافی مایع.. 52

 

4-1-2 نتایج آزمون‌های میکروبی گوشت قرمز و سفید. 67

 

4-1-3 نتایج به دست آمده با روش ایمونواسی.. 71

 

4-1-4 نتایج به دست آمده توسط کیت جستجوگر پنی‌سیلین: 93

 

4-2 بحث… 93

 

فصل 5 نتیجه‌گیری.. 97

 

5-1 پیشنهادات… 99

 

منابع و مراجع.. 101

 

فهرست جدول­ها

 

جدول ‏3‑1: حلال‌های متداول برای فاز متحرك در HPLC.. 36

 

جدول ‏3‑2: فازهای ساكن HPLC و كاربردهای رایج آنها 39

 

جدول ‏3‑3: ستون‌های فاز برگشتی رایج و میزان قطبیت نسبی آنها 40

 

جدول ‏3‑4: طول و قطر داخلی ستون. 41

 

جدول ‏3‑5: تفسیر محیط TSI بر اساس عمق محیط.. 46

 

جدول ‏3‑6: تقسیر محیط TSI بر اساس سطح مایل محیط.. 46

 

جدول ‏3‑7: مشخصات سالمونلاها از نظر واکنش‌های بیوشیمیایی.. 48

 

جدول ‏4‑1: نتایج باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه شیر (ppb) 58

 

جدول ‏4‑2: نتایج باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه شیر (ppb) 59

 

جدول ‏4‑3: نتایج باقیمانده پنی‌سیلین جدا شده در 15 نمونه شیر (ppb) 60

 

جدول ‏4‑4: باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه گوشت قرمز (ppb) 61

 

جدول ‏4‑5: باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه گوشت قرمز (ppb) 62

 

جدول ‏4‑6: باقیمانده پنی‌سیلین جدا شده در 15 نمونه گوشت قرمز (ppb) 63

 

جدول ‏4‑7: باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه تخم مرغ (ppb) 64

 

جدول ‏4‑8: باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه تخم مرغ (ppb) 65

 

جدول ‏4‑9: باقیمانده پنی‌سیلین جدا شده در 15 نمونه تخم مرغ (ppb) 66

 

جدول ‏4‑10: باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه گوشت سفید (ppb) 67

 

جدول ‏4‑11: باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه گوشت سفید (ppb) 68

 

جدول ‏4‑12: باقیمانده پنی‌سیلین جدا شده در 15 نمونه گوشت سفید (ppb) 69

 

 

جدول ‏4‑13: نتیجه جداسازی باکتری سالمونلا از 10 نمونه گوشت بسته‌بندی قرمز. 70

 

جدول ‏4‑14: جداسازی باکتری اشرشیاکلی از 10 نمونه گوشت بسته‌بندی قرمز. 71

 

جدول ‏4‑15: نتیجه جداسازی باکتری سالمونلا از 10 نمونه گوشت بسته‌بندی سفید. 71

 

جدول ‏4‑16: جداسازی باکتری اشرشیاکلی از 10 نمونه گوشت بسته‌بندی سفید. 72

 

جدول ‏4‑17: باکتری استافیلوکوک اورئوس کواگولاز مثبت از 10 نمونه گوشت بسته‌بندی سفید. 72

 

 

 

فهرست شکل­ها

 

شکل ‏1‑1: فرمول ساختاری تتراسایکلین.. 8

 

شکل ‏1‑2: فرمول ساختاری اکسی‌تتراسایکلین.. 8

 

شکل ‏1‑3: فرمول ساختاری پنی‌سیلین.. 9

 

شکل ‏1‑4: فرمول ساختاری کلرامفنیکل. 9

 

شکل ‏4‑1: کروماتوگرام تزریق مسققیم محلول‌های مادر پنی‌سیلین.. 54

 

شکل ‏4‑2: کروماتوگرام تزریق مسققیم محلول‌های مادر کلرامفنیکل. 54

 

شکل ‏4‑3: کروماتوگرام تزریق مسققیم محلول‌های مادر تتراسایکلین.. 55

 

شکل ‏4‑4: کروماتوگرام  پنی‌سیلین در نمونه‌های گوشت سفید. 55

 

شکل ‏4‑5: کروماتوگرام تتراسایکلین در نمونه‌های گوشت سفید. 56

 

شکل ‏4‑6: کروماتوگرام کلرامفنیکل در نمونه‌های گوشت سفید. 56

 

شکل ‏4‑7: کروماتو گرام پنی‌سیلین در نمونه‌های گوشت قرمز. 57

 

شکل ‏4‑8: کروماتوگرام تتراسایکلین‌ها در نمونه‌های گوشت قرمز. 57

 

شکل ‏4‑9: کروماتوگرام کلرامفنیکل در نمونه‌های گوشت قرمز. 58

 

شکل ‏4‑10: باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه شیر (ng/ml) 73

 

شکل ‏4‑11: باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه گوشت سفید (ng/ml) 76

 

شکل ‏4‑12: باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه گوشت قرمز (ng/ml) 79

 

شکل ‏4‑13: باقیمانده تتراسایکلین جدا شده در 15 نمونه تخم مرغ (ng/ml) 82

 

شکل ‏4‑14: باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه شیر (ng/ml) 85

 

شکل ‏4‑15: باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه تخم مرغ (ng/ml) 87

 

شکل ‏4‑16: باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه گوشت سفید (ng/ml) 90

 

شکل ‏4‑17: باقیمانده کلرامفنیکل جدا شده در 15 نمونه گوشت قرمز(ng/ml) 93

 

شکل ‏5‑1: درصد نمونه‌های دارای باقیمانده کلرامفنیکل بیش از حد مجاز در دو روش تست.. 99

 

شکل ‏5‑2: درصد میانگین میزان باقیمانده تتراسایکلین نسبت به حد مجاز. 100

 

شکل ‏5‑3: درصد میانگین میزان باقیمانده پنی‌سیلین نسبت به حد مجاز  در تست HPCL.. 100

 

 

 

چکیده

 

این مطالعه بر روی 4 ماده غذایی مورد مصرف مردم انجام شد که شامل شیر، گوشت قرمز و سفید بسته‌بندی و تخم مرغ بود. از هر کدام از این مواد تعداد 15 نمونه از مناطق مختلف تهران در شهریور ماه 1391 جمع‌آوری شد. این نمونه‌ها برای بررسی 4 آنتی‌بیوتیک تتراسایکلین، اکسی‌تتراسایکلین، پنی‌سیلین و کلرامفنیکل با روش کروماتوگرافی مایع و ایمونواسی انتخاب شدند.

 

در روش HPLC از ستون C18 و فاز متحرک (1 mil/min) که شامل استات آمونیوم، اسید استیک و متانول بود، استفاده شد. در روش آزمون الایزا از کیت‌های تشخیصی proximal استفاده شد. همچنین از کیت explore  برای تشخیص حضور یا عدم حضور پنی‌سیلین به استفاده شد. تمامی نمونه‌های مورد آزمایش با روش HPLC باقیمانده دارویی کمتر از حد مجازهای تعیین شده نشان دادند به غیر از آنتی‌بیوتیک کلرامفنیکل که بالاتر از حد مجاز بود. این نتیجه در مورد آزمون الایزا نیز صادق بود. لازم به ذکر است که در بعضی از نمونه‌های شیر و تخم مرغ که به روش ایمونواسی اندازه‌گیری شدند، نتایج حاصل کمتر از حد تشخیص کیت بود که با HPLC به طور دقیق اندازه‌گیری شد. کیت جستجوگر پنی‌سیلین نشان از عدم حضور پنی‌سیلین در تمامی نمونه‌ها داشت. میزان بار میکروبی 3 باکتری سالمونلا و اشرشیاکلی و استافیلوکوک اورئوس کواگولاز مثبت در گوشت‌های بسته‌بندی بررسی شدند که سالمونلا در تمامی آنها منفی ولی باکتری اشرشیاکلی در تعدادی از نمونه‌ها بیشتر از حد مجاز تعیین شده بود. استافیلوکوک‌های جدا شده از گوشت‌های مرغ نیز کمتر از حد مجاز تعیین شده بود.