1-9 تعریف پروپولیس……………………………………………………………………………………….. 15

 

1-9-1 ترکیبات پروپولیس………………………………………………………………………………….. 16

 

1-9-2 تاثیر بره موم بر روی اینترفرون ها……………………………………………………………….. 18

 

1-9-3 مصارف بره موم………………………………………………………………………………………. 18

 

1-10 ضرورت انجام تحقیق………………………………………………………………………………… 19

 

1-10-1 اهداف………………………………………………………………………………………………… 20

 

1-10-2 فرضیات ……………………………………………………………………………………………. 21

 

فصل دوم: مروری بر تحقیقات انجام شده…………………………………………………………………. 23

 

فصل سوم: مواد و روش ها…………………………………………………………………………………… 28

 

3-1 تهیه و تزریق عصاره پروپولیس به حیواانات……………………………………………………….. 28

 

3-1-1 تهیه عصاره آبی – الکلی پروپولیس……………………………………………………………… 28

 

3-2 حیوانات آزمایشگاهی…………………………………………………………………………………… 31

 

3-2-1 گرو های مورد مطالعه در این طرح……………………………………………………………… 31

 

3-3 نمونه گیری………………………………………………………………………………………………… 32

 

3-4 روش سنجش هورمونی………………………………………………………………………………… 33

 

3-5 روش بافت شناسی و شمارش فولیکول ها………………………………………………………… 34

 

3-5-1 روش رنگ آمیزی هماتوکسیلین – ائوزین……………………………………………………… 34

 

3-5-2 روش رنگ آمیزیPAS…………………………………………………………………………….. 36

 

3-6 روش ارزیابی آپوپتوز(مرگ برنامه ریزی شده سلول)……………………………………………. 37

 

3-6-1 روش کار …………………………………………………………………………………………….. 38

 

3-6-2 نتیجه رنگ آمیزی تانل……………………………………………………………………………… 39

 

فصل چهارم: نتایج………………………………………………………………………………………………. 41

 

4-1 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر وزن بدن و وزن تخمدان نوزادان…………. 41

 

4-2 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر سطح سرمی کورتیکوسترون……………….. 42

 

4-3 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر سطح سرمی 17بتا- استرادیول……………. 43

 

4-4 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر تعداد و قطر اووسیت و تعداد انواع
فولیکولهای تخمدانی نوزادان…………………………………………………………………………………. 44

 

4-5 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر تعداد فولیکولهای آترتیک تخمدان ………. 45

 

4-6 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر قطر اووسیت………………………………….. 46

 

4-7 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر تعداد اووسیت………………………………… 47

 

4-8 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس بر تعداد سلولهای گرانولوزای تانل مثبت ….. 54

 

فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری …………………………………………………………………………… 61

 

5-1 بحث……………………………………………………………………………………………………….. 61

 

5-1-1 یافته‎های اصلی تحقیق………………………………………………………………………………. 61

 

5-1-2 اثر استرس مزمن دوران نوزادی و عصاره پروپولیس بر وزن بدن و وزن تخمدان
موشهای صحرایی……………………………………………………………………………………………….. 62

 

5-1-3 اثر استرس مزمن دوران نوزادی و عصاره پروپولیس بر سطح 17- بتا استرادیول…….. 64

 

5-1-4 اثر استرس مزمن دوران نوزادی و عصاره پروپولیس بر تعداد انواع فولیکولهای
تخمدانی و فرآیند آترزی فولیکولی…………………………………………………………………………. 65

 

5-1-5 اثر استرس مزمن دوران نوزادی و عصاره پروپولیس بر تعداد و قطر اووسیت………… 66

 

5-1-6 اثر استرس مزمن دوران نوزادی و عصاره پروپولیس بر فرآیند مرگ برنامه ریزی شده
(آپوپتوزیس) سلولهای گرانولوزا……………………………………………………………………………. 67

 

5-2 نتیجه گیری ………………………………………………………………………………………………. 69

 

پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………… 70

 

منابع انگلیسی……………………………………………………………………………………………………. 71

 

چکیده انگلیسی………………………………………………………………………………………………….. 78

 

فهرست جدول ها

 

عنوان…………………………………………………………………………………………………………… صفحه

 

جدول 4-1 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس ایرانی بر وزن بدن حیوان……………… 41

 

جدول4-2 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس ایرانی بر تعداد و قطر اووسیت……….. 45

 

جدول 4-3 اثر استرس پس از تولد و عصاره پروپولیس ایرانی بر میانگین تعداد فولیکول ها…. 46

 

فهرست نمودار ها

 

عنوان…………………………………………………………………………………………………………… صفحه

 

نمودار 4-1 اثر پروپولیس بر سطح سرمی کورتیکوسترون(نانوگرم/میلی لیتر) نوزادان موش های
صحرایی تحت استرس دوری از مادر…………………………………………………………………….. 42

 

نمودار 4-2 اثر پروپولیس بر سطح سرمی 17بتا- استرادیول(نانوگرم/میلی لیتر) نوزادان موش های
صحرایی تحت استرس دوری از مادر……………………………………………………………………… 43

 

 

نمودار 4-3 اثر پروپولیس بر قطر اووسیت (میکرومتر) نوزادان موش های صحرایی
تحت استرس دوری از مادر………………………………………………………………………………….. 46

 

نمودار 4-4 اثر پروپولیس بر تعداد اووسیت(در 022/0 میلیمتر مربع سطح تخمدان) نوزادان
موش های صحرایی تحت استرس دوری از مادر……………………………………………………….. 47

 

نمودار 4-5 اثر پروپولیس بر تعداد سلولهای گرانولوزای تانل مثبت تخمدان نوزادان
موش های صحرایی تحت استرس دوری از مادر………………………………………………………. 54

 

فهرست شکل ها

 

عنوان ………………………………………………………………………………………………………….. صفحه

 

شکل1-1 بافت های تخمدانی…………………………………………………………………………………. 4

 

شکل1-2 انواع فولیکول ها در مقطع تخمدان، بزرگنمایی ×٤۰…………………………………………. 4

 

شکل3-1 پروپولیس…………………………………………………………………………………………… 30

 

شکل3-2 تزریق پروپولیس…………………………………………………………………………………… 32

 

شکل3-3نمونه گیری از بافت تخمدان…………………………………………………………………….. 33

 

شکل3-4 خون گیری از ناحیه قلب………………………………………………………………………… 34

 

شکل4-1 تصویر تخمدان موش صحرایی در گروه سالم………………………………………………. 49

 

شکل4-2 تصویر تخمدان موش صحرایی در گروه سالم………………………………………………. 50

 

شکل 4-3 تصویر تخمدان موش صحرایی در گروه استرس+پروپولیس 50……………………… 51

 

شکل 4-4 تصویر تخمدان موش صحرایی در گروه استرس+پروپولیس 100……………………. 52

 

شکل 4-5 تصویر تخمدان موش صحرایی در گروه استرس+پروپولیس 200……………………. 53

 

شکل 4-6 گروه سالم با رنگ آمیزی TUNEL  ………………………………………………………… 56

 

شکل 4-7 گروه استرس با رنگ آمیزی TUNEL  …………………………………………………….. 57

 

شکل 4-8 گروه استرس + پروپولیس 50 با رنگ آمیزی TUNEL  ………………………………. 58

 

شکل 4-9 گروه استرس + پروپولیس100 با رنگ آمیزی TUNEL  ……………………………… 59

 

1-1-2-6-آثار فارماکولوژیکی گیاه آرتیشو یا کنگر فرنگی.. 12

 

1-1-2-7- عوارض جانبی گیاه کنگر فرنگی.. 12

 

1-1-2-8- دلایل استفاده از گیاه به عنوان منابع آنتی اکسیدان. 13

 

1-1-2-9- اعمال مهم آنتی اکسیدان ها 13

 

1-1-2-10-رادیکال های آزاد 14

 

1-1-2-10-1- استرس اکسیداتیو. 14

 

1-2- استامینوفن. 15

 

1-2-1- تاریخچه کشف استامینوفن. 15

 

1-2-2- کاربرد های استامینوفن. 17

 

1-2-3- نام آیوپاک… 18

 

1-2-4- اشکال دارویی استامینوفن. 18

 

1-2-5- مکانیسم اثر استامینوفن. 18

 

1-2-7- عوارض جانبی استامینوفن. 19

 

1-3- کبد 19

 

1-3-1- کبد و سم زدایی.. 20

 

1-3-2- نقش كبد در دفع. 21

 

1-3-3- آمینو ترانسفراز ها 21

 

1-3-3-1- چه داروهایی باعث ایجاد سطح غیرطبیعی آمینوترانسفرازها می گردند 23

 

1-3-3-2- سایر آنزیم های کبدی چگونه هستند 24

 

1-3-3-3- موارد سطح غیر طبیعی آنزیم های کبدی چه هستند 24

 

1-3-4- بیماری های کبد 26

 

1-3-4-1- نکروز کبدی ماسیو و مفرط.. 26

 

1-3-4-2- بیماری کبدی القا شده توسط دارو و توکسین. 27

 

1-5- پیشینه تحقیق.. 28

 

فصل دوم: روش تحقیق

 

2-1- مواد و و وسایل و تركیبات شیمیائی مصرفی.. 34

 

2-2- دستگاه ها، لوازم و تجهیزات غیر مصرفی.. 37

 

2-3- روشها و مراحل اجرای آزمایش… 38

 

2-3-1- نحوه انتخاب و شرایط نگهداری حیوانات مورد آزمایش… 38

 

2-3-2-گروه بندی حیوانات مورد آزمایش… 39

 

2-3-3- چگونگی تهیه و تجویز عصاره هیدروالکلی گیاه آرتیشو. 40

 

2-3-4- طریقه گاواژ كردن حیوان. 41

 

2-3-5- القاء مسمومیت توسط استامینوفن در موش های صحرایی.. 42

 

2-3-6- خون گیری.. 43

 

2-3-7- روش تهیه ی سرم 44

 

2-3-8- تست های آزمایشگاهی بر روی نمونه های سرم خون. 44

 

2-3-8-1- اندازه گیری آنزیم های آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) و آسپارتات آمینو ترانسفراز(AST) 44

 

2-3-9- روش های تجزیه وتحلیل و محاسبه آماری.. 45

 

فصل سوم: نتایج

 

3-1- مقایسه نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) در  گروه های مورد بررسی  47

 

3-2- مقایسه نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) در گروه های مورد بررسی  55

 

3-3- مقایسه نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) در گروه های مورد بررسی  63

 

فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری

 

نتیجه گیری.. 80

 

پیشنهادها 80

 

منابع و مآخذ

 

منابع فارسی.. 82

 

منابع انگلیسی.. 84

 

ABSTRACT.. 93

 

فهرست جداول

 

جدول 3-1 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) 48

 

جدول 3-2 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) 49

 

جدول 3-3 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز ALT)…51

 

 

جدول 3-4 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) 53

 

جدول 3-5 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 55

 

جدول 3-6 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 57

 

جدول 3-7 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 59

 

جدول 3-8 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 61

 

جدول 3-9 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 63

 

جدول 3-10 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 65

 

جدول 3-11 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 67

 

جدول 3-12مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 69

 

فهرست نمودار ها

 

نمودار3-1- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) 48

 

نمودار 3-2- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) 50

 

نمودار 3-3- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) 52

 

نمودار3-4- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) 54

 

نمودار 3-5- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 56

 

نمودار 3-6- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 58

 

نمودار 3-7- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 60

 

نمودار 3-8- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آسپارتات آمینو ترانسفراز (AST) 62

 

نمودار 3-9- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 64

 

نمودار 3-10- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 66

 

نمودار 3-11- نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 68

 

نمودار 3-12 مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلکالن فسفاتاز (ALP) 70

 

فهرست شکل‌ها

 

شکل (1-1) گیاه آرتیشو(کنگر فرنگی) 7

 

شکل (1-2) ساختار شیمیایی پاراستامول. 18

 

شکل (2-1)محل نگهداری حیوانات… 38

 

شکل (2-2) روش وزن کردن رت ها 40

 

شکل (2-3) دستگاه روتاری. 41

 

شکل (2-4) روش تجویز دارو به صورت گاواژ. 42

 

1-1-8-2.کاتالاز……………………………………………………………………………………………………. 11

 

1-1-8-3.گلوتاتیون پراکسیداز(GSH)………………………………………………………………………. 11

 

1-1-9. پلی فنول…………………………………………………………………………………………………… 12

 

1-1-9-1-گروه های اصلی ترکیبات فنولی………………………………………………………………….. 13

 

1-1-10. فلاونوئیدها……………………………………………………………………………………………… 13

 

1-1-10-1.خواص آنتی اکسیدانی فلاونوئیدها……………………………………………………………… 13

 

1-1-10-2. شیمی گیاه فلاونوئیدها……………………………………………………………………………. 15

 

1-1-10-3. آپیژنین……………………………………………………………………………………………….. 16

 

1-1-10-4. فلاوونوئید ها معمولا به روش های زیر عمل می کنند…………………………………….. 16

 

1-1-10-5. فارماکودینامی فلاونوئیدها……………………………………………………………………….. 17

 

1-1-10-6. جهش زایی و سمیّت ژنی مصرف زیاد فلاونوئیدها……………………………………….. 17

 

1-1-11. رادیکال های آزاد……………………………………………………………………………………… 18

 

1-1-11-1. استرس اکسیداتیو………………………………………………………………………………….. 18

 

1-1-11-2. واکنش های رادیکال های آزاد………………………………………………………………….. 20

 

1-1-11-3. تقسیم بندی انواع رادیکال های آزاد…………………………………………………………… 21

 

1-1-11-4. انواع گونه های رادیکالی اکسیژن و نیتروژن…………………………………………………. 22

 

1-1-11-5. روش های مختلف تولید گونه های اکسیژن و نیتروژن……………………………………. 22

 

1-1-11-6. اثر رادیکال های آزاد بر روی چربی ها………………………………………………………. 23

 

1-1-11-7. سیستم های مقابله با آسیب رادیکال های آزاد………………………………………………. 23

 

1-2. کبد………………………………………………………………………………………………………………. 24

 

1-2-1. ساختمان کبد……………………………………………………………………………………………… 24

 

1-2-2. تشریح و آناتومی کبد……………………………………………………………………………………. 25

 

1-2-3. بافت شناسی کبد…………………………………………………………………………………………. 27

 

1-2-4. سلول های كبدی………………………………………………………………………………………….. 27

 

1-2-5. نقش سیستم لنفاوی در عملکرد کبد…………………………………………………………………. 30

 

1-2-6. ترمیم بافت در کبد افراد بزرگسال……………………………………………………………………. 31

 

1-2-7. اعمال ترشّحی و دفع كبد……………………………………………………………………………….. 31

 

1-2-7-1. متابولیسم و دفع گزنوبیوتیک ها…………………………………………………………………… 32

 

1-2-8. متابولیسم کربوهیدرات ها………………………………………………………………………………. 33

 

1-2-9. متابولیسم لیپید ها………………………………………………………………………………………… 34

 

1-2-10. اختلال هموستاز در بیماری های کبدی…………………………………………………………… 35

 

1-2-10-1. آنزیم های رها شده از بافت کبدی بیمار……………………………………………………… 36

 

1-2-10-2. ویژگی بافتی………………………………………………………………………………………… 37

 

1-2-10-3. توزیع داخل سلولی آنزیم ها……………………………………………………………………. 38

 

1-2-10-4. فعایت نسبی در کبد و پلاسما………………………………………………………………….. 38

 

1-2-10-4. مکانیسم آزاد سازی……………………………………………………………………………….. 39

 

1-2-10-5. سرعت پاکسازی آنزیم ها از پلاسما…………………………………………………………… 40

 

1-2-11. انواع بیماری های کبد………………………………………………………………………………….. 40

 

1-2-11-1. مکانیسم ها و الگو های آسیب………………………………………………………………….. 41

 

1-2-12. آنزیم آلانین آمینو ترانسفراز (ALT) (GPT) (SGPT) (ALAT)……………………… 42

 

1-2-13. آنزیم آسپارات آمینوترانسفراز (AST)…………………………………………………………….. 43

 

1-2-14. آنزیم الكالین فسفاتاز (ALP)……………………………………………………………………….. 44

 

1-2-15. پروتئین تام……………………………………………………………………………………………….. 46

 

1-2-15-1. میزان پروتئین های خون……………………………………………………………………………. 46

 

1-2-16. اندازه گیری آلبومین پلاسما……………………………………………………………………………. 48

 

1-2-17. بیلی روبین پلاسما………………………………………………………………………………………. 48

 

1-2-17-1. بیلی روبین و انواع آن………………………………………………………………………………. 49

 

1-2-18. وظایف عملی پروتئین های پلاسما…………………………………………………………………. 49

 

1-2-19. ساخت پروتئین های پلاسما………………………………………………………………………….. 50

 

1-2-20. ازت اوره خون…………………………………………………………………………………………. 51

 

1-2-21. کراتینین………………………………………………………………………………………………….. 51

 

1-3. تتراکلرید کربن و سمّیت آن……………………………………………………………………………….. 53

 

1-3-1. مکانیسم ها ی فعال سازی متابولیکی تتراکلرید کربن…………………………………………….. 54

 

 

1-3-2. پراکسیداسیون چربی ها…………………………………………………………………………………. 56

 

1-3-3. نقص در ساخت پروتئین………………………………………………………………………………. 57

 

1-3-4. به هم خوردن تعادل کلسیم……………………………………………………………………………. 57

 

فصل دوم: مواد و روش ها

 

2-1. دستگاه‌ها و لوازم و تجهیزات مورد استفاده…………………………………………………………….. 60

 

2-2. تركیبات شیمیایی و مواد مصرفی…………………………………………………………………………. 61

 

2-3.دستگاه پرکولاتور……………………………………………………………………………………………………………62

 

2-4. روش تهیه عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس…………………………………………………………….. 63

 

2-5. حیوانات مورد استفاده و نحوة ‌نگهداری آنها…………………………………………………………… 65

 

2-6. گروه بندی حیوانات…………………………………………………………………………………………. 66

 

2-7. روش دادن عصاره…………………………………………………………………………………………… 68

 

2-8. روش تجویز دارو……………………………………………………………………………………………. 68

 

2-9. خونگیری از قلب …………………………………………………………………………………………… 69

 

2-10. روش تعیین فعالیت آنزیم آسپارتات آمنیوترانسفراز (AST/GOT) و آنزیم الانین آمینوترانسفراز (GPT/ALT)……………… 70

 

2-11. روش تعیین فعالیت آنزیم الكالین فسفاتاز (ALP)……………………………………………….. 71

 

2-12. روش تعیین میزان ‌ آلبومین و بیلی روبین در سرم خون………………………………………….. 71

 

2-12. روشهای تجزیه و تحلیل آماری………………………………………………………………………… 73

 

فصل سوم: نتایج

 

3-1. نتایج مربوط به غلظت آنزیم  AST در گروه های آزمایشی………………………………………. 75

 

3-2. نتایج مربوط به غلظت آنزیم  ALT در گروه های آزمایشی………………………………………. 78

 

3-3. نتایج مربوط به غلظت آلکالین فسفاتاز در گروه های آزمایشی……………………………………. 82

 

3-4. نتایج مربوط به غلظت آلبومین در گروه های آزمایشی………………………………………………. 85

 

3-5. نتایج مربوط به غلظت بیلی روبین توتال (T.Billi) در گروه های آزمایشی…………………… 88

 

3-6. نتایج مربوط به غلظت بیلی روبین مستقیم (D.Billi) در گروه های آزمایشی………………… 91

 

3-7. مقایسه نتایج مربوط به  وزن موشهای صحرایی در پایان آزمایش در گروه های آزمایشی…… 93

 

فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری

 

4-1. بحث……………………………………………………………………………………………………………. 98

 

4-2. نتیجه گیری………………………………………………………………………………………………….. 107

 

4-3.پیشنهادات……………………………………………………………………………………………………. 108

 

فهرست منابع

 

منابع فارسی…………………………………………………………………………………………………………. 110

 

منابع لاتین………………………………………………………………………………………………………………………….112

 

Abstract…………………………………………………………………………………………………………. 122

 

فهرست جداول

 

جدول2 -1: گروه بندی نمونه ها بر اساس مصرف عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس و تتراکلرید کربن…………………………………….. 66

 

جدول 3-1 مقایسه میانگین غلظت آنزیم AST در گروه کنترل و شاهد………………………………………..76

 

جدول 3-2: اثر تزریق درون صفاقی(IP) عصاره هیروالکلی گیاه کرفس بر میزان غلظت آنزیم آسپارتات آمینوترانسفراز……………………………….. 77

 

جدول 3-3 : مقایسه میانگین غلظت آنزیم ALT در گروه کنترل و شاهد……………………………………..79

 

جدول3-4: اثر تزریق درون صفاقی(IP) عصارههیدروالکلی گیاه کرفس بر میزان غلظت آنزیم آلانین آمینوترانسفراز  80

 

جدول 3-5: مقایسه میانگین غلظت آنزیم آلکالین فسفاتاز در گروه کنترل و شاهد…………………………82

 

جدول 3-6: اثر تزریق درون صفاقی(IP) عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس با مقادیر مختلف بر میزان غلظت آنزیم آلکالین فسفاتاز…………………………….. …..83

 

جدول 3-7: مقایسه میانگین غلظت آلبومین در گروه کنترل و شاهد…………………………………………….85

 

جدول 3-8: اثر تزریق درون صفاقی(IP) عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس با مقادیر مختلف بر میزان غلظت آلبومین   86

 

جدول 3-9: مقایسه میانگین غلظت بیلی روبین توتال در گروه کنترل و شاهد………………………………..88

 

جدول3-10: اثر تزریق درن صفاقی(IP) عصاره هیدروالکی گیاه کرفس با مقادیر مختلف بر میزان غلظت بیلی روبین توتال……………………… 89

 

جدول 3-11: مقایسه میانگین غلظت بیلی روبین مستقیم در گروه کنترل و شاهد…………………………..91

 

جدول3-12: اثر تزریق درون صفاقی(IP) عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس با مقادیر مختلف بر میزان بیلی روبین مستقیم………………………… 92

 

جدول 3-13: مقایسه میانگین وزن موش های صحرایی در گروه کنترل و شاهد……………………………94

 

جدول3-14: اثر تزریق درون صفاقی(IP) عصاره هیدروالکلی گیاه کرفس با مقادیر مختلف بر میزان وزن………………………… 95

 

فهرست نمودارها

 

نمودار (3-1): نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم AST در گروه کنترل و شاهد…………………………76

 

نمودار (3-2): نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم AST……………………………………………….. …………78

 

نمودار(3-3): نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم ALT در گروه کنترل و شاهد………………………….80

 

نمودار (3-4): نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم ALT ……………………………………………………….81

 

نمودار(3-5): نتایج مربوط به میانگین غلظت آنزیم ALP در گروه کنترل و شاهد……………………….83

 

نمودار (3-6): نتایج مربوط به میانگین غلظت آلکالین فسفاتاز ………………………………………………………84

 

نمودار(3-7): نتایج مربوط به میانگین غلظت آلبومین در گروه کنترل و شاهد…………………………………86

 

نمودار (3-8): نتایج مربوط به میانگین غلظت آلبومین …………………………………………………………………87

 

نمودار(3-9): نتایج مربوط به میانگین غلظت بیلی روبین توتال  در گروه کنترل و شاهد………………….89

 

نمودار (3-10): نتایج مربوط به میانگین غلظت بیلی روبین توتال …………………………………………………90

 

نمودار(3-11): نتایج مربوط به میانگین غلظت بیلی روبین مستقیم  در گروه کنترل و شاهد……………..92

 

نمودار (3-12): نتایج مربوط به میانگین غلظت بیلی روبین مستقیم ……………………………………………….93

 

نمودار(3-13): نتایج مربوط به میانگین وزن موش های صحرایی  در گروه کنترل و شاهد……………..95

 

نمودار (3-14): نتایج مربوط به میانگین وزن موش های صحرایی در پایان آزمایش………………………..       96

 

فهرست شکل ها

 

شکل (1-1): گیاه کرفس………………………………………………………………………………………………………………… 7

 

شکل (1-2-): ساختار فلاونوئیدها…………………………………………………………………………………………..  16

 

2-1-3. کاربرد لیپو پلی ساکارید در مطالعات ایمونولوژیکی………………………………………………………………. 19

 

2-1-3-1. نقش لیپو پلی ساکارید باکتریایی در افزایش پاسخ ایمنی به کاندیدا آلبیکنز……………….. 19

 

2-1-3-2. نقش لیپو پلی ساکارید در تسریع ترمیم زخم اپیتلیوم مجاری تنفسی…………………………. 21

 

2-1-3-3. قابلیت میتوژنی لیپو پلی ساکارید در تکثیر لنفوسیت‌های B…………………………………………. 21

 

2-1-3-4. اثر لیپو پلی ساکارید بر پرولیفراسیون فیبروبلاست‌ها………………………………………………………. 22

 

2-1-3-5. اثر سینرژیسمی‌پروتئین نوترکیب CagA و لیپو پلی ساکارید در بروز پاسخ ایمنی مناسب علیه هلیکوباکتر پیلوری…………………… 23

 

2-1-3-6. نقش حفاظتی لیپو پلی ساکارید در بقای پیوند سلول‌های بنیادی…………………………………. 24

 

2-1-3-7. فعالیت ضد سرطانی لیپو پلی ساکارید……………………………………………………………………………… 25

 

2-2. سالمونلا………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 28

 

2-2-1. پاسخ ایمنی میزبان به عفونت سالمونلایی……………………………………………………………………………… 29

 

2-2-1-1. پاسخ ایمنی ذاتی علیه سالمونلا………………………………………………………………………………………… 29

 

2-2-1-2. پاسخ ایمنی اکتسابی علیه سالمونلا………………………………………………………………………………….. 30

 

2-2-1-3. سایتوکاین‌ها و کموکاین‌های دخیل در عفونت سالمونلایی……………………………………………… 30

 

2-3. التهاب…………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 31

 

2-3-1. ویژگی‌های التهاب…………………………………………………………………………………………………………………….. 31

 

2-3-2. میانجی‌های التهاب…………………………………………………………………………………………………………………… 32

 

2-4. لیپو پلی ساکارید و التهاب……………………………………………………………………………………………………………. 33

 

2-5. سیکلو اکسیژناز……………………………………………………………………………………………………………………………… 34

 

2-5-1. تاریخچه ی سیکلو اکسیژناز…………………………………………………………………………………………………….. 35

 

2-5-2. ساختار پروتئینی سیکلو اکسیژناز…………………………………………………………………………………………… 35

 

2-5-3. سیکلو اکسیژناز‌ها و سنتز پروستانوئید‌ها………………………………………………………………………………… 36

 

2-5-4. اعمال پروستاگلاندین‌ها……………………………………………………………………………………………………………. 37

 

2-5-5. بیولوژی سیکلو اکسیژناز………………………………………………………………………………………………………….. 37

 

2-5-6. فیبروبلاست و سیکلو اکسیژناز……………………………………………………………………………………………….. 38

 

2-5-7. نقش سیکلو اکسیژناز-2 در آنژیوژنز………………………………………………………………………………………. 39

 

2-5-8. سیکلو اکسیژناز و لیپو پلی ساکارید……………………………………………………………………………………….. 40

 

2-6. هیدروژن پر اکسید……………………………………………………………………………………………………………………….. 43

 

2-6-1. تاریخچه‌ی هیدروژن پر اکسید………………………………………………………………………………………………… 43

 

2-6-2. بیولوژی هیدروژن پر اکسید……………………………………………………………………………………………………. 44

 

2-6-3. گونه‌های واکنشگر اکسیژن……………………………………………………………………………………………………… 45

 

2-6-4. ROS و منابع تولید آن……………………………………………………………………………………………………………. 46

 

2-6-5. سیستم اکسیداسیون- احیا و تکثیر سلولی………………………………………………………………………….. 47

 

2-6-7. ردوکس و تمایز سلول‌های بنیادی………………………………………………………………………………………….. 49

 

2-6-8. ردوکس و تمایز سلول بنیادین جنینی به سلول‌های ماهیچه صاف (SMC)………………………. 50

 

2-7. نیتریک اکسید………………………………………………………………………………………………………………………………. 51

 

2-7-1. سنتز نیتریک اکسید……………………………………………………………………………………………………………….. 52

 

2-7-2. عملکرد NOS…………………………………………………………………………………………………………………………… 53

 

2-7-3. نقش‌های فیزیولوژیکی NO…………………………………………………………………………………………………….. 53

 

2-7-4. اثر NO بر رگ‌های خونی……………………………………………………………………………………………………….. 53

 

2-7-5. نقش NO در سیستم ایمنی…………………………………………………………………………………………………… 54

 

2-7-6. نقش NO در التهاب………………………………………………………………………………………………………………… 54

 

2-7-7. نقش NO در سیستم عصبی………………………………………………………………………………………………….. 55

 

2-7-8. NO و مرگ تدریجی سلول…………………………………………………………………………………………………….. 55

 

2-7-9. نقش iNOS در القای COX-2……………………………………………………………………………………………….. 55

 

2-7-10. نقش iNOS در تکثیر…………………………………………………………………………………………………………… 56

 

2-8. پوست…………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 57

 

2-8-1. فیبروبلاست………………………………………………………………………………………………………………………………. 58

 

2-9. زخم……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 61

 

2-9-1. چگونگی ترمیم زخم طی روز‌های مختلف…………………………………………………………………………….. 61

 

2-9-1-1. 24 ساعت اول…………………………………………………………………………………………………………………….. 61

 

2-9-1-2. روز سوم……………………………………………………………………………………………………………………………….. 62

 

2-9-1-3. روز پنجم……………………………………………………………………………………………………………………………… 62

 

2-9-1-4. هفته‌ی دوم………………………………………………………………………………………………………………………….. 62

 

 

2-9-1-5. اواخر ماه اول……………………………………………………………………………………………………………………….. 62

 

2-9-2. مراحل ترمیم زخم…………………………………………………………………………………………………………………… 63

 

2-9-2-1. مرحله‌ی التهابی…………………………………………………………………………………………………………………… 63

 

2-9-2-1-1. میانجی‌های شیمیایی التهاب…………………………………………………………………………………………. 67

 

2-9-2-1-2. پروستاگلاندین‌ها و لوکوترین‌ها……………………………………………………………………………………… 67

 

2-9-2-2. مرحله‌ی تکثیر…………………………………………………………………………………………………………………….. 67

 

2-9-2-2-1. ری اپیتلیالیزاسیون………………………………………………………………………………………………………… 68

 

2-9-2-2-2. فیبروپلازیا………………………………………………………………………………………………………………………. 68

 

2-9-2-2-3. آنژیوژنز……………………………………………………………………………………………………………………………. 69

 

2-9-2-3. مرحله‌ی بازسازی………………………………………………………………………………………………………………… 69

 

2-9-3. اهمیت ماکروفاژ‌ها در التیام زخم……………………………………………………………………………………………. 69

 

2-9-3-1. فنوتیپ ماکروفاژ‌های زخم………………………………………………………………………………………………….. 70

 

2-9-3-2. اثر ماکروفاژ‌ها بر فیبروبلاست‌ها و میو فیبروبلاست‌ها………………………………………………………. 71

 

2-9-3-3. ماکروفاژ‌ها در مرحله‌ی التهاب……………………………………………………………………………………………. 72

 

2-9-4. زخم و هیدروژن پراکسید……………………………………………………………………………………………………….. 73

 

2-9-4-1. اثرات مثبت استرس اکسیداتیو در التیام زخم………………………………………………………………… 77

 

2-9-4-1-1. انعقاد……………………………………………………………………………………………………………………………….. 77

 

2-9-4-1-2. آغاز و دوام فاز التهابی…………………………………………………………………………………………………… 78

 

2-9-4-1-3. ری اپیتلیالیزاسیون………………………………………………………………………………………………………… 78

 

2-9-4-1-4. آنژیوژنز و رسوب ماتریکس……………………………………………………………………………………………. 79

 

2-9-4-2. اثر منفی استرس اکسیداتیو و استرس نیترو اکسیداتیو در ترمیم زخم………………………… 80

 

2-9-5. نیتریک اکسید و زخم……………………………………………………………………………………………………………… 82

 

2-9-5-1. اثر مثبت نیتریک اکسید در ترمیم زخم………………………………………………………………………….. 82

 

2-9-5-1-1. التهاب……………………………………………………………………………………………………………………………… 83

 

2-9-5-1-2. آنژیوژنز……………………………………………………………………………………………………………………………. 83

 

2-9-5-1-3. ری اپیتلیالیزاسیون………………………………………………………………………………………………………… 83

 

2-9-5-1-4. رسوب ماتریکس و بازسازی…………………………………………………………………………………………… 84

 

2-9-5-2. کاربرد نیتریک اکسید در درمان زخم……………………………………………………………………………….. 85

 

فصل سوم: مواد و روش‌ها

 

3-1. مواد و وسایل و دستگاه‌های بکار رفته در آزمایش………………………………………………………………………. 89

 

3-2. طرز تهیه‌ی محلول‌ها و معرف‌های بکار رفته………………………………………………………………………………. 91

 

3-2-1. محیط کشت DMEM…………………………………………………………………………………………………………….. 91

 

3-2-2. FBS………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 91

 

3-2-3. بافر PBS…………………………………………………………………………………………………………………………………… 91

 

3-3. کشت سلول‌های فیبروبلاست………………………………………………………………………………………………………. 91

 

3-4. آماده‌سازی غلظت‌های مختلف لیپو پلی ساکارید……………………………………………………………………….. 92

 

3-5. تیمار لیپو پلی ساکاریدی فیبروبلاست‌ها…………………………………………………………………………………….. 93

 

3-6. رنگ‌آمیزی XTT…………………………………………………………………………………………………………………………… 93

 

3-7. رنگ‌آمیزی تریپان بلو……………………………………………………………………………………………………………………. 95

 

3-8. شمارش سلولی………………………………………………………………………………………………………………………………. 95

 

3-9. تعیین درصد زنده ماندن سلول‌ها………………………………………………………………………………………………… 95

 

3-10. تعیین میزان نیتریک اکسید در نمونه‌ی لیز شده سلولی………………………………………………………. 96

 

3-10-1. آماده سازی نمونه‌ها………………………………………………………………………………………………………………. 96

 

3-10-2. روش کار………………………………………………………………………………………………………………………………… 96

 

3-11. تعیین میزان هیدروژن پر اکسید در نمونه‌ی لیز شده سلولی……………………………………………….. 97

 

3-11-1. آماده‌سازی نمونه‌ها………………………………………………………………………………………………………………… 97

 

3-11-2. منحنی استاندارد H₂O₂……………………………………………………………………………………………………….. 98

 

3-11-3. مخلوط واکنش………………………………………………………………………………………………………………………. 98

 

3-12. اندازه‌گیری سطح آنزیم COX-2 در نمونه لیز شده سلولی…………………………………………………… 98

 

3-12-1. مواد………………………………………………………………………………………………………………………………………… 99

 

3-12-2. آماده‌سازی محلول‌ها……………………………………………………………………………………………………………… 99

 

3-12-3. آماده‌سازی نمونه‌ها………………………………………………………………………………………………………………… 99

 

3-12-4. روش کار……………………………………………………………………………………………………………………………… 100

 

3-13. حیوانات آزمایشگاهی انتخاب شده برای تحقیق…………………………………………………………………… 101

 

3-13-1. روش‌های نگهداری و پرورش موش کوچک آزمایشگاهی………………………………………………… 101

 

3-13-1-1. نیاز‌های محیطی موش کوچک آزمایشگاهی……………………………………………………………….. 101

 

3-13-1-2. بستر مناسب………………………………………………………………………………………………………………….. 103

 

3-13-1-3. رعایت اصول بهداشتی در نگهداری و پرورش موش کوچک آزمایشگاهی………………… 103

 

3-13-1-4. تغذیه……………………………………………………………………………………………………………………………… 104

 

3-14. اجرای الگوی زخم…………………………………………………………………………………………………………………… 105

 

3-15. تیمار موضعی لیپو پلی ساکارید…………………………………………………………………………………………….. 107

 

3-16. آماده‌سازی لیزات بافت……………………………………………………………………………………………………………. 109

 

3-17. تعیین میزان نیتریک اکسید در نمونه‌ی بافت لیز شده………………………………………………………. 110

 

3-17-1. آماده‌سازی نمونه‌ها……………………………………………………………………………………………………………… 110

 

3-17-2. روش کار……………………………………………………………………………………………………………………………… 110

 

3-18. تعیین میزان هیدروژن پراکسید برای نمونه‌های بافتی لیز شده…………………………………………. 111

 

3-18-1. آماده‌سازی نمونه‌ها……………………………………………………………………………………………………………… 111

 

3-18-2. منحنی استاندارد H₂O₂…………………………………………………………………………………………………….. 111

 

3-18-3. مخلوط واکنش……………………………………………………………………………………………………………………. 112

 

3-19. اندازه‌گیری سطح آنزیم COX-2 برای نمونه‌های بافتی لیز شده……………………………………….. 112

 

3-20. بررسی هیستوپاتولوژیکی بافت‌های زخم شده………………………………………………………………………. 113

 

3-21. آنالیز آماری……………………………………………………………………………………………………………………………… 113

 

فصل چهارم: نتایج

 

4-1. بررسی میزان حیات سلول‌ها بدون تیمار LPS (بعد از 24 و 48 ساعت)……………………………. 116

 

4-2. بررسی اثر LPS بر میزان پرولیفراسیون سلول‌های فیبروبلاست با استفاده از روش XTT….. 117

 

4-3. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر فیبروبلاست در گروه اول (بررسی اثر LPS بر فیبروبلاست بلافاصله)      118

 

4-4. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر فیبروبلاست در گروه دوم (بررسی اثر LPS بر فیبروبلاست با فاصله‌ی یک روز)   119

 

4-5. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر میزان NO در گروه اول (بررسی اثر LPS بر فیبروبلاست بلافاصله)       121

 

4-6. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر میزان NO در گروه دوم (بررسی اثر LPS بر فیبروبلاست با فاصله‌ی یک روز)     122

 

4-7. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر میزان H₂O₂ در گروه اول (بررسی اثر LPS بر فیبروبلاست بلافاصله)     123

 

4-8. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر میزان H₂O₂ در گروه دوم (بررسی اثر LPS بر فیبروبلاست با فاصله‌ی یک روز)   124

 

4-9. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر میزان COX-2 در گروه اول (بررسی اثر LPS بر فیبروبلاست بلافاصله)  125

 

4-10. ارتباط دوز LPS با اثر LPS بر میزان COX-2 در گروه دوم (بررسی اثر LPS بر فیبرئبلاست با فاصله‌ی یک روز)………….. 126

 

4-11. اثر LPS بر میزان NO در زخم موش‌ها در روز‌های مختلف……………………………………………….. 127

 

4-12. اثر LPS بر میزان H₂O₂ در زخم موش‌ها در روز‌های مختلف…………………………………………….. 128

 

4-13. اثر LPS بر میزان COX-2 در زخم موش‌ها در روز‌های مختلف………………………………………… 129

 

4-15. نتایج نمونه‌های پاتولوژی…………………………………………………………………………………………………………. 132

 

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

 

5-1. اثر LPS سالمونلا انتریکا بر تکثیر سلول‌های فیبروبلاست……………………………………………………… 138

 

5-2. بررسی اثر LPS بر زخم ایجاد شده در شرایط invivo…………………………………………………………… 142

 

5-3. اثر LPS بر میزان NO، H₂O₂ و COX-2 در شرایط invitro………………………………………………… 144

 

منابع……………………………………………………………………………………………………………….. 149

 

خلاصه انگلیسی……………………………………………………………………………………………….. 162

 

فهرست جداول

 

جدول 4-1. نتایج حاصل از بررسی های پاتولوژیک لام های تهیه شده از بافت زخم………………….. 135

 

فهرست نمودارها

 

نمودار 4-1. بررسی میزان حیات سلول‌ها بدون تیمار LPS (بعد از 24 ساعت)…………………………… 116

 

نمودار 4-2. بررسی میزان حیات سلول‌ها بدون تیمار LPS (بعد از 48 ساعت)…………………………… 117

 

نمودار 4-3. بررسی میزان حیات سلولی برای گروه اول که تیمار بلافاصله LPS داشتند (24، 48 و 72 ساعت بعد از تیمار)……………….. 118

 

نمودار 4-4. بررسی میزان حیات سلولی برای گروه دوم که تیمار LPS برای آنها با فاصله‌ی یک روز بعد از کشت سلولی بود (24، 48 و 72 ساعت بعد از تیمار)…….. 119

 

نمودار 4-5. بررسی میزان حیات سلولی برای گروه اول که تیمار بلافاصله LPS داشتند (24، 48 و 72 ساعت بعد از تیمار)………. 120

 

نمودار 4-6. بررسی میزان حیات سلولی برای گروه دوم که تیمار LPS برای آنها با فاصله‌ی یک روز بعد از کشت سلولی بود (24، 48 و 72 ساعت بعد از تیمار)…….. 120

 

نمودار 4-7. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت NO بلافاصله بعد از کشت سلولی (72 و 48 ساعت بعد از تیمار)       121

 

نمودار 4-8. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت NO با فاصله یک روز بعد از کشت سلولی (48 و 24 ساعت بعد از تیمار) … 122

 

نمودار 4-9. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت H₂O₂ بلافاصله بعد از کشت سلولی (72 و 48 ساعت بعد از تیمار)     123

 

نمودار 4-10. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت H₂O₂ با فاصله یک روز بعد از کشت سلولی (48 و 24 ساعت بعد از تیمار) . 124

 

نمودار 4-11. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت COX-2 بلافاصله بعد از کشت سلولی (72 و 48 ساعت بعد از تیمار) .. 125

 

نمودار 4-12. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت COX-2 با فاصله یک روز بعد از کشت سلولی (48 و 24 ساعت بعد از تیمار) ……. 126

 

نمودار 4-13. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت NO پس از 1، 2، 3 و 7 روز بعد از اجرای الگوی زخم       127

 

نمودار 4-14. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت H₂O₂ پس از 1، 2، 3 و 7 روز بعد از اجرای الگوی زخم     128

 

نمودار 4-15. بررسی میزان اثر LPS بر فعالیت COX-2 پس از 1، 2، 3 و 7 روز بعد از اجرای الگوی زخم  129

 

فهرست اشكال

 

شکل 2-1. ترکیب غشای باکتری‌های گرم منفی غشای سیتوپلاسمی‌یا غشای داخلی، سلول باکتری را احاطه می‌کند. 14

 

شکل 2-2. ساختار LPS از نوع صاف نشان دهنده‌ی انشعاب اختصاصی O، مرکز داخلی و خارجی، لیپید A می‌باشد 15

 

شکل 2-3. ساختار LPS از نوع زبر………………………………………………………………………………………………………. 16

 

شکل 2-4. ساختار لیپید A در سالمونلا تیفی موریوم و اشریشیا کلی…………………………………………….. 19

 

شکل 2-5. سالمونلا انتریتیدیس…………………………………………………………………………………………………………… 28

 

شکل 2-6. اجزای متقاطع التهاب…………………………………………………………………………………………………………. 31

 

شکل 2-7. متابولیسم اسید آراشیدونیک…………………………………………………………………………………………….. 33

 

شکل 2-8. مسیر انتقال سیگنال توسط رسپتور‌های شبه تول…………………………………………………………… 34

 

شکل 2-9. مسیر بیوسنتز پروستانوئید‌ها……………………………………………………………………………………………… 36

 

شکل 2-10. تأثیر COX-2 بر آنژیوژنز………………………………………………………………………………………………… 40

 

شکل 2-11. اثر LPS بر تولید PGE₂………………………………………………………………………………………………….. 41

 

شکل 2-12. نمایی از مکانیسم اثر LPS بر تحریک تولید COX-2………………………………………………….. 42

 

شکل 2-13. منابع تولید کننده ROS…………………………………………………………………………………………………. 47

 

شکل 2-14. سیستم اکسیداسیون- احیا و تکثیر سلولی………………………………………………………………….. 48

 

شکل 2-15. نقش ROS در چرخه‌ی سلولی………………………………………………………………………………………. 50

 

شکل 2-16. مراحل سنتز نیتریک اکسید…………………………………………………………………………………………… 52

 

شکل 2-17. رابطه‌ی بین NO، COX-2 و ROS با LPS…………………………………………………………………. 57

 

شکل  2-18. فیبروبلاست…………………………………………………………………………………………………………………….. 58

 

شكل 2-19. نمایی شماتیک از اندامک‌های داخلی فیبروبلاست……………………………………………………….. 60

 

شکل 2-20. مراحل ترمیم زخم پوستی……………………………………………………………………………………………… 63

 

شکل 2-21. نگاهی کلی به فاز التهابی ترمیم زخم……………………………………………………………………………. 65

 

شکل 2-22. روز سوم زخم (فاز التهابی)……………………………………………………………………………………………… 66

 

شکل 2-23. روز پنجم زخم (مرحله‌ی ری اپیتلیالیزاسیون و رگ‌سازی)…………………………………………. 66

 

شکل 2-24. کنترل مستقیم و غیر مستقیم ری اپیتلیزاسیون، آنژیوژنز و فعالیت فیبروبلاست‌ها توسط ماکروفاژها      72

 

شکل 2-25. اثر سلول‌های مختلف در ترمیم زخم……………………………………………………………………………… 73

 

شکل 2-26. مدل فرضی از نقش گونه‌های واکنشگر اکسیژن در مکانیسم سیگنال‌دهی فاکتور رشد اپیدرمی در سلول‌های اپیتلیال…………………. 80

 

شکل 2-27. مدلی فرضی برای تنظیم ساخت کلاژن………………………………………………………………………… 84

 

شکل 3-1. احیای کلرومتریک XTT با آنزیم‌های سلولی……………………………………………………………………. 94

 

شکل 3-2. نگهداری از حیوانات آزمایشگاهی……………………………………………………………………………………. 101

 

شکل 3-3. نحوه قرارگیری موش‌های آزمایشگاهی در قفس‌های مخصوص…………………………………….. 105

 

شکل 3-4. روز صفر پس از اجرای الگوی زخم………………………………………………………………………………… 107

 

شکل 3-5. روزهای مختلف پس از اجرای الگوی زخم…………………………………………………………………….. 108

 

شکل 3-6. نحوه گرفتن بیوپسی از محل زخم و تقسیم‌بندی نمونه‌ها به منظور انتقال به آزمایشگاه‌های بیوشیمی و پاتولوژی…………….. 109

 

1-6- تشکیل فیبرین و سیستم فیبرینولایتیک……………………………………………………………. 15

 

1-7- هموستاز و سرطان…………………………………………………………………………………….. 18

 

1-8- ترومبوز و سرطان……………………………………………………………………………………… 20

 

1-9- ترومبین………………………………………………………………………………………………… 21

 

1-9-1- ارتباط پلی مورفیسم PT G20210A و خطر ابتلاء به سرطان و ترومبوز……….. 22

 

1-10- فیبرینوژن……………………………………………………………………………………………… 23

 

1-10-1- ارتباط پلی مورفیسم FGB-455G/A و خطر ابتلاء به سرطان و ترومبوز…….. 24

 

1-11- بازدارنده ی فعال كننده پلاسمینوژن1 (PAI-1)…………………………………………….. 25

 

1-11-1- ارتباط پلی مورفیسم PAI-1 (4G/5G)و خطر ابتلاء به سرطان و ترومبوز……. 27

 

1-12- اهدف …………………………………………………………………………………………………. 28

 

فصل دوم: مواد و روش ها

 

2-1- مقدمه……………………………………………………………………………………………………. 30

 

2-2- مواد و وسایل لازم جهت انجام آزمایشهای مولکولی ………………………………………… 31

 

2-3- استخراج DNA از خون…………………………………………………………………………… 33

 

2-4- بررسی کیفیت و کمیت ژنوم استخراج شده …………………………………………………….. 34

 

2-4-1- تعیین کیفیت و کمیت ژنوم با استفاده از دستگاه اسپكتروفتومتر نانودراپ …………. 34

 

2-4-2- تعیین میزان کیفیت ژنوم با استفاده از الکتروفورز ……………………………………….. 36

 

2-5- واكنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) ……………………………………………………………….. 37

 

 

2-5-1- مراحل PCR …………………………………………………………………………………… 37

 

2-6- روش تکثیر متزلزل جهش ها(ARMS-PCR)  …………………………………………….. 39

 

2-7- کنترل داخلی……………………………………………………………………………………………… 41

 

2-8- تهیه مخلوط PCR ………………………………………………………………………………….. 42

 

2-9- الكتروفورز……………………………………………………………………………………………… 46

 

2-9-1- الكتروفورز بر روی ژل آگارز………………………………………………………………… 46

 

2-9-2- مواد مورد نیاز برای الكتروفورز با ژل آگارز………………………………………………. 47

 

2-10- الكتروفورز ژل آگارز بر روی محصولات PCR مورد مطالعه …………………………… 48

 

2-11- عكس برداری از ژل………………………………………………………………………………… 49

 

2-12- آنالیز آماری داده ها…………………………………………………………………………………. 49

 

فصل سوم: نتایج

 

3-1- مقدمه …………………………………………………………………………………………………… 51

 

3-2- اطلاعات مربوط به بیماران میوم رحمی و افراد سالم…………………………………………. 52

 

3-3- بررسی یک عامل خطر در جمعیت مورد مطالعه ……………………………………………… 52

 

3-3-1- رابطه بین سن و خطر ابتلاء به میوم رحمی………………………………………………. 52

 

3-4-  بررسی پلی مورفیسم های مورد مطالعه و خطر ابتلاء به میوم رحمی …………………… 54

 

3-4-1-  بررسی پلی مورفیسم  G20210Aدر پروموتر ژن پروترومبین ………………….. 54

 

3-4-1-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PT G20210A ………………………… 55

 

3-4-2-  بررسی پلی مورفیسم -455G/A  FGB………………………………………………. 58

 

3-4-2-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم -455G/A FGB ………………………. 59

 

3-4-3-  بررسی پلی مورفیسم PAI-1 (4G/5G) ……………………………………………… 62

 

3-4-3-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PAI-1 (4G/5G) ……………………… 63

 

فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری

 

4-1- مقدمه …………………………………………………………………………………………………… 67

 

4-2- بحث …………………………………………………………………………………………………… 68

 

4-2-1- بررسی ارتباط بین سن و خطر ابتلاء به میوم رحمی……………………………………. 68

 

4-2-2- ارتباط پلی مورفیسم های مورد مطالعه و خطر ابتلاء به سرطان………………………. 68

 

4-2-2-1- ارتباط پلی مورفیسم PT G20210A و خطر ابتلاء به سرطان …………….. 68

 

4-2-2-2- ارتباط پلی مورفیسم FGB-455G/A و خطر ابتلاء به سرطان …………….. 69

 

4-2-2-3- ارتباط پلی مورفیسم  PAI-1 (4G/5G)و خطر ابتلاء به سرطان ………….. 70

 

4-2-3- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم های مورد مطالعه ………………………………… 71

 

4-2-3-1- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PT G20210A ………………………… 71

 

4-2-3-2- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم FGB-455G/A ……………………….. 73

 

4-2-3-3- توزیع ژنوتیپی و آللی پلی مورفیسم PAI-1-675 (4G/5G) ……………… 74

 

 

4-3- نتیجه گیری ……………………………………………………………………………………………. 76

 

4-4- پیشنهادات……………………………………………………………………………………………… 77

 

فهرست منابع و مأخذ ……………………………………………………………………………………….. 78

 

منابع فارسی ……………………………………………………………………………………………………. 78

 

منابع غیر فارسی…………………………………………………………………………………………………. 78

 

چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………… 92

 

فهرست جداول

 

جدول2-1: مواد لازم جهت آزمایشهای مولکولی………………………………………………………… 31

 

جدول2-2: دستگاه و وسایل لازم جهت آزمایشهای مولکولی………………………………………… 32

 

جدول2-3: توالی آغازگرهای به کار رفته در روش ARMS-PCR………………………………. 40

 

جدول2-4: توالی آغازگرها، به منظور کنترل داخلی……………………………………………………… 41

 

جدول2-5: غلظت نهایی اجزای واکنش PCR به منظور تکثیر ژن  PT G20210A………… 43

 

جدول2-6: غلظت نهایی اجزای واکنش PCR به منظور تکثیر ژن FGB-455G/A…………. 43

 

جدول2-7: غلظت نهایی اجزای واکنش PCR به منظور تکثیر ژن (4G/5G)  PAI-1-675 44

 

جدول2-8: برنامه PCR جهت تكثیر ژن فاكتور II…………………………………………………….. 44

 

جدول2-9: برنامه PCR جهت تكثیر ژن β- فیبرینوژن……………………………………………….. 45

 

جدول2-10: برنامه PCR جهت تكثیر ژن PAI-1……………………………………………………. 45

 

جدول3-1: اطلاعات مربوط به بیماران میوم رحمی و افراد سالم…………………………………….. 52

 

جدول3-2: درصد فراوانی بیماری در گروه های مختلف سنی……………………………………….. 53

 

جدول3-3: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه G20210A PT و خطر ابتلاء به میوم رحمی….. 55

 

جدول3-4: تجزیه و تحلیل آللی و ژنوتیپی پلی مورفیسم G20210A PT ……………………. 56

 

جدول3-5: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه G20210A PT در دو گروه بیمار و شاهد…….. 57

 

جدول3-6: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه -455G/A FGB و خطر ابتلاء به میوم رحمی… 59

 

جدول3-7: تجزیه و تحلیل آللی و ژنوتیپی پلی مورفیسم FGB-455G/A …………………… 60

 

جدول3-8: توزیع ژنوتیپی وآللی در ناحیه -455G/A FGB در دو گروه بیمار و شاهد…….. 61

 

جدول3-9: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه 4G/5G ژن PAI-1 و خطر ابتلاء به میوم رحمی 63

 

جدول3-10: تجزیه و تحلیل آللی و ژنوتیپی پلی مورفیسم PAI-1-675 (4G/5G)  ……… 64

 

جدول3-11: توزیع ژنوتیپی و آللی در ناحیه 4G/5G ژن PAI-1 در دو گروه بیمار و شاهد 65

 

جدول4-1: توزیع آللی پلی مورفیسم PT G20210A در جمعیت های مختلف …………….. 72

 

جدول4-2: توزیع آللی پلی مورفیسم FGB-455G/A در جمعیت های مختلف …………….. 74

 

جدول4-3: توزیع آللی پلی مورفیسم PAI-1-675 (4G/5G) در جمعیت های مختلف ….. 75

 

فهرست نمودارها

 

نمودار3-1: با افزایش سن احتمال ابتلاء به میوم رحمی افزایش یافته است…………………………………. 53

 

فهرست شکل ها

 

شکل1-1: محل قرار گیری میوم ها در رحم……………………………………………………………….. 7

 

شکل1-2: نمودار طرح واره هموستاز ……………………………………………………………………… 14

 

شكل1-3: تشكیل لخته فیبرین……………………………………………………………………………….. 16

 

شكل1-4: فیبرینولایز…………………………………………………………………………………………… 17